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目的:应用qRT-PCR以及Western blot技术,并结合实验兔和转基因小鼠心电图检测结果来探索miR-1976对起搏相关基因Cav1.2和Cav1.3的影响,进而探索老年性窦房结功能减退的分子机制。方法:1.从昆明市呈贡新城昆明医科大学实验动物学部购入15只健康日本大耳白兔,雌雄不限,按年龄分为5个实验组,分别为6月、1年、2年、3年、4年组。将已经分好组的实验兔在实验前一天停止喂食,在实验中对其进行中度麻醉(异氟烷麻醉),并进行心电图的打印记录,随后在动物手术室进行窦房结组织的取材工作。将取好的组织贮存在液氮罐中,防止RNA及蛋白质降解。最后对已剪取的窦房结组织进行qRT-PCR和Westerm blot实验,得出实验结果,并结合心电图进行数据分析。2.从赛业生物科技有限公司购买了 miR-1976过表达的C57BL/6 阳性F1代小鼠共12只:3雄4雌(2015年11月18日生)、4雄1雌(2015年11月30日生),并在昆明市呈贡新城昆明医科大学实验动物学部(SCXK(滇)K2015-0005,SYXK(滇)K2015-0002)进行F2代及F3代的繁殖工作。通过对转基因小鼠进行剪尾,将得到的组织进行DNA提取和PCR的鉴定,得到野生型,杂合子以及纯合子小鼠。将经繁殖得到的F2代野生型,杂合子以及纯合子小鼠进行表型观察和心电图的记录,并将得到的数据进行归纳总结和分析。结果:1.随着实验兔年龄的增加,心率出现一个逐渐递减的现象,尤其6月组与3年、4年组实验兔的平均心率对比,具有显著差异,平均心率明显降低。随着年龄增长,miR-1976在窦房结中的表达呈现逐渐增长的过程。随后对不同年龄组实验兔的miR-1976的起搏相关基因Cav1.2、Cav1.3进行蛋白质检验,发现Cav1.2、Cav1.3的蛋白表达随着年龄的增长,表达水平降低。在对miR-1976的表达与起搏相关基因蛋白表达进行相关性分析时,我们发现,miR-1976与起搏相关基因Cav1.2、Cav1.3的转录与表达具有负相关性,相关系数分别为R2=0.7739、R2=0.8333,且都具有显著性差异P<0.05。2.miR-1976过表达转基因小鼠中,纯合子敲入小鼠在形态上较野生型小鼠生长缓慢,且体形较小。在各实验组平均心率方面,经统计学分析发现,野生型小鼠,杂合小鼠和纯合小鼠的平均心率,呈现逐渐降低的趋势。结论:miR-1976有可能通过下调起搏相关基因Cav1.2、Cav1.3的转录与表达,从而导致窦房结功能减退,最终引起动物发育迟缓及平均心率降低。