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目的提出糖尿病心肌病变存在“痰瘀阻络”假说,研究“痰瘀同治”法的抵当汤和小陷胸汤合方(以下简称抵当陷胸汤)对糖尿病心肌病大鼠心肌微血管和ECM病变等相关指标的影响,并设化瘀通络、化痰及西药组进行对照,探究“痰瘀互结阻络”病机与AGEs病理蓄积及其所引发的心肌病变相关的联系,证明“搜剔络道痰瘀同治”治法对糖尿病心肌病变的干预机制与AGEs的蓄积与降解密切相关,同时促进《伤寒论》经典名方在临床上的运用,为糖尿病心肌病寻找新的治疗思路。方法120只体质量为220±20g的健康雄性SD大鼠适应性饲养5天后,将这些大鼠随机分为两大组,随机选取110只用于复制糖尿病(DM)造模,剩下的10只作为正常组饲养观察。在待造模的大鼠禁食不禁水24小时后,采取单次腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)溶液,给药剂量为55mg/kg,最终共有90只大鼠符合DCM模型标准。再将90只成功造模的大鼠分为:模型组、痰瘀同治组(TY)、化瘀通络组(HY)、化痰组(HT)、AGEs特异性蛋白交联抑制剂组(ALT),每组18只。给药方法:正常组和模型组:均按1.0ml/(100g·d)剂量灌胃蒸馏水;TY组、HY组和HT组:均按生药1g/(100g·d)分别灌胃抵当陷胸汤、血府逐瘀汤和小陷胸汤;ALT组:选择AGEs特异性蛋白交联抑制剂ALT-711用蒸馏水溶解(现用现配),按0.3mg/(100g·d)灌胃。所有组每日灌胃一次,灌胃时间统一定于早上9时。所有大鼠灌胃8周后,禁食禁水12小时后腹腔注射麻醉,腹主动脉采血,快速摘离心脏,留取并处理标本,观察如下指标:1大鼠心肌微血管和ECM变化情况:(1)左心室肌HE染色,光镜下观察并摄像;(2)透射电子显微镜观察心肌细胞、心肌微血管内皮细胞及基底膜的变化。2糖尿病心肌病变中AGEs蓄积的影响:(1)Elisa试剂盒检测血清和心肌组织AGEs的含量;(2)Western blot法和免疫组化法检测CTGF及其受体LRP的表达。3糖尿病心肌病变中AGEs降解的影响:(1)实时荧光定量PCR检测MSR1、SR-B1和CD36基因的表达;(2)Western blot法测定MSR1、SR-B1和CD36蛋白表达。结果在实验过程中共有22只动物死亡或被剔除,与模型组比较,各处理组大鼠一般情况均不同程度改善,以TY组和ALT组改善最明显;就血糖值而言,与模型组比较,虽然各处理组的血糖值呈下降的趋势,但并无显著性差异(P>0.05)。1(1)HE染色结果显示:正常组可见心肌纤维排列整齐,走行无异常,无断裂,心肌细胞核呈圆形或椭圆形,位于细胞中央,胞浆染色均匀;模型组心肌细胞严重损伤,心肌纤维排列紊乱,纤维断裂,细胞核不同程度的变形;各治疗组心肌变性较模型组不同程度好转,心肌纤维紊乱程度较轻,其中ALT组和TY组对于心肌纤维排列与走行及周围结构的改善更趋向于正常组。(2)透射电子显微镜结果显示:正常组心肌细胞肌丝排列整齐,无断裂,肌浆中含有丰富的线粒体,无变性,血管内皮连续完整;模型组心肌细胞损伤明显,肌丝紊乱稀疏,大部分肌丝扭曲断裂,核膜水肿,部分线粒体肿胀明显,胞浆内可见空泡变性,嵴明显减少,毛细血管基底膜薄厚不均匀,血管壁增厚,内皮细胞断裂脱落;与模型组相比,各治疗组心肌超微结构均有不同程度的改善,心肌细胞肌丝排列较为整齐,核膜水肿不甚明显,胞浆中线粒体较丰富,形态轻度肿胀,个别有畸形变性,其嵴较密集,排列较有序,血管壁增厚不明显,内皮细胞排列较有序,其中ALT组和TY组心肌细胞超微结构轻度损伤,形态结构接近正常组。2(1)Elisa法测定大鼠血清和心肌组织AGEs的表达:与正常组比较,模型组大鼠血清和心肌组织中AGEs的表达均上调,具有极显著性差异(P<0.01);各用药组血清和心肌组织中下调AGEs的表达,与模型组比较,具有极显著性差异(P<0.01),各组之间进行比较发现,ALT组下调AGEs水平最好,其次是TY组。(2)Western blot法和免疫组化法测定心肌组织中CTGF及其受体LRP的蛋白表达:正常组中,CTGF和LRP蛋白表达在胞浆内分布均匀;模型组大鼠心肌细胞的胞浆和胞膜内CTGF较正常组大量表达,差异显著(P<0.05);与模型组比较,各治疗组均下调了CTGF表达量,差异具有统计学意义(P<0.05);而各治疗组LRP表达结果均无统计学意义。3(1)实时荧光定量PCR检测MSR1、SR-B1和CD36的表达:与正常组相比,模型组MSR1与CD36表达水平明显升高(P<0.05),SR-B1表达水平明显降低(P<0.05);各治疗组与模型组比较,MSR1与CD36均有不同程度降低,SR-B1表达水平升高,且差异具有统计学意义(P<0.05);组间比较发现,TY和ALT组效果优于HT组和HY组。(2)Western blot检测MSR1、SR-B1和CD36的表达:模型组与空白组对比,心肌组织中MSR1与CD36的表达量升高,SR-B1蛋白的表达水平下降,均有具显著性差异(P<0.05);与模型组比较,各治疗组的MSR1与CD36的表达水平均有不同程度的降低,SR-B1表达水平显著升高,差异均具有统计学意义(P<0.05),其中ATL组和TY组表达水平最趋于正常组。结论1“痰瘀同治”能干扰心肌病变中微血管病变、纤维化病变以及AGEs的蓄积降解,与ALT组作用相当,说明此治法在防治糖尿病心肌病变方面具有较好效果。2“搜剔络道痰瘀同治”干预糖尿病心肌病变的机制可能与减少AGEs的累积和加速其降解有关。3抵当陷胸汤是防治糖尿病心肌病变的有效方剂。