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蜱唾液含有许多生物活性分子，这些分子与蜱的叮咬、吸血和病原体的传播有关。其中，MicroRNA(miRNA)是一类短的非编码RNA，长度为19-24个核苷酸，它们在转录后水平上与目标mRNA结合，作为基因表达的调节分子，调控多种细胞功能，如生长、代谢和发育的调节。因此，从蜱唾液中发现和鉴定重要的miRNA分子，将有助于解析病原体和宿主之间相互作用的分子机制，也可能有助于发现新的蜱的药物控制靶标，应用于控制蜱及蜱传病。 采集长角血蜱的唾液样本，构建小RNA转录组文库，进行测序。该数据库检测到1740万个长度在18-30个核苷酸的clean reads，总共发现319个已知miRNA和1个未知miRNA。其中丰度最高的10个miRNA是miR-100-2、miR-315、miR-184-1、miR-100-5p-2、miR-5307、miR-184-3p-3、Let-7-5p-6、miR-71-5、miR-1-3p-6、miR-375和miR-184。 本研究对miR-375和miR-184二个分子进行进一步功能研究。对miR-375在不同发育阶段的蜱以及成蜱的不同组织进行实时定量PCR(qRT-PCR)分析，结果显示在蜱的不同发育阶段，miR-375的表达在未吸血的若蜱中表达最高，胚胎中的表达最低;在成蜱的不同组织中，miR-375在唾液腺中转录水平最高。为研究miR-375的功能，反义Ant-375被用来抑制miR-375的转录，与反义对照Ms-ant和未注射的对照组相比，实验组(Ant-375)蜱产卵数量显著减少(t(10)=2.652，P=0.0242)，卵的孵化率也显著降低(t(10)=2.272，P=0.0242)。对miR-184在不同发育阶段的蜱以及成蜱的不同组织进行实时定量PCR(qRT-PCR)分析，结果显示在蜱的不同发育阶段，miR-184在未吸血若蜱中的转录水平最高，在未吸血幼蜱中最低;mir-184的组织分布检测结果表明，它在中肠中转录水平最高。为了研究miR-184的功能，反义Ant-184被用来抑制mir-184的转录，可显著性下调mir-184(t(4)=12.32，P=0.0002)，与非注射组对照组和反义对照Ms-Ant组(t(22)=2.19，P=0.0388)相比，实验组（Ant-184）蜱的饱血体重显著降低，产卵时间(33.5±1.91)延长，卵的数量(t(10)=3.147，P=0.0137)和卵的质量(t(10)=3.4472，P=0.0063)显著减少。 对三个实验组的产卵过程进行监测，与对照组相比，Ant-184组饱血蜱所产的卵完全干燥死亡，未孵化，孵化率显著降低。为了进一步探索导致蜱产卵天数、产卵数量和质量和孵化率的变化的机制，我们预测了miR-184的靶标蛋白为蜱卵黄蛋白Vg和K-10蛋白靶点。我们对miR-184沉默后的半饱血蜱（吸血第4天）、饱血的蜱（吸血第6天）、饱血后第2天的蜱中的Vg(Vg1，Vg2，Vg3)和K-10的表达的变化进行检测，结果显示不同吸血时间段K-10的表达无显著差异。在吸血第4天，Vg1(P＜0.0001)，Vg2(P=0.0180)，和Vg3(P=0.0061)基因上(P=0.0189)和Vg3(P=0.0149)显著上调。在卵胚阶段Vg1(P=0.003)和Vg3(P=0.009)高表达，而Vg2(P=0.0034)显著低表达。 本实验首次研究了蜱的唾液中miRNA种类和数量特征，构建了长角血蜱唾液的小RNA文库，蜱唾液中鉴定的miRNA将有助于揭示蜱病原体和宿主之间相互作用的分子机制，并为防控蜱及蜱传病提供新的策略。研究证明了miR-375在蜱产卵和卵孵化中的作用，抑制该分子将减少蜱的产卵和卵的孵化。研究还证明miR-184的沉默对长角血蜱的血液消化和产卵有影响，这与调控蜱的Vg不同时间的表达相关，miR-184的沉默导致产卵时间延长、产卵量和孵化率显著降低。对每个miRNA及其在无脊椎动物载体中的靶基因预测、验证和作用机制进行详细分析，是本项工作进一步的探索的方向。