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目的:宫颈癌是全球发病率居第二位的妇女恶性肿瘤,在我国的发病率居首位[1],其高发区连接成片,且发病人群有年轻化的趋势[2],成为严重威胁妇女健康的疾病之一。宫颈癌的发生、发展是一个由量变到质变,由渐变到突变的过程。局部浸润和淋巴结转移不仅影响手术效果,而且直接关系患者预后。淋巴结转移是宫颈癌的主要转移途径,在早期即可发生。有文献报道,无淋巴结转移者五年生存率为82.2%。有淋巴结转移者五年生存率为50.8%[3]。尽管宫颈癌的治疗研究已近百年,成绩显著,但其疗效还未能达到普遍接近“早期宫颈癌5年生存率90%-100%”的水平。近些年来,随着细胞工程和基因工程技术的发展,肿瘤免疫治疗亦得以迅猛发展,细胞因子基因治疗成为目前研究的热点。IL-8是1987年Yoshimur等[4]发现的第一个趋化因子。IL-8可以促进肿瘤细胞的增生,使肿瘤细胞向内皮细胞迁移[5]。随着对IL-8及其受体生物学活性和作用机制研究的深入,发现其受体在宫颈癌的发生发展中起着重要作用。IL-8受体(IL-8 receptor, IL-8R)存在于许多种类型的细胞中,甚至包括一些不表达IL-8的细胞,主要包括IL-8RA和IL-8RB两种类型。增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antige PCNA)是目前研究最透彻的肿瘤细胞增殖标记物之一,其表达显示出与增殖细胞存在直接相互关系。PCNA的异常表达与宫颈癌的发生发展相关。目前,裸鼠移植瘤模型已成为研究恶性肿瘤的生物学特征和筛选抗癌药物的主要工具。本实验成功建立了Hela细胞裸鼠移植瘤模型。应用RT-PCR技术研究IL-8受体IL-8RA,IL-8RB在宫颈癌组织中的表达;应用免疫组织化学技术研究增殖细胞核抗原(PCNA)在Hela细胞裸鼠移植瘤内的表达,探讨转染白细胞介素8 (IL-8)基因对裸鼠宫颈癌Hela细胞体内成瘤的影响并对其可能的机制进行研究。以期为宫颈癌的诊治和预后判断提供新的指标。方法:1材料:稳定表达IL-8的宫颈癌细胞株Hela/hIL-8细胞和转染空载体的Hela/pcDNA3.1(+)细胞株均有本室保存。实验动物:无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级BALB/C裸小鼠,雌性,4-6周龄,体重16-18g,购自北京协和动物中心。2皮下移植瘤动物模型的建立使用21只BALB/C遗传背景的雌性裸小鼠作为实验动物,随机分成三组,分别于右后背部皮下注Hela/hIL-8、Hela/pcDNA3.1(+)和Hela三种细胞悬液0.2ml(细胞总数约为5×106个)。3观察各组裸鼠的肿瘤生长情况和出瘤时间,每周测量肿瘤大小并比较,9周后杀死小鼠取肿瘤标本及肺组织。4半定量RT-PCR技术:用RT-PCR技术在相同条件下检测各组肿瘤组织IL-8RA及IL-8RB的表达情况,然后进行统计学分析。5免疫组织化学法:采用SP法,按试剂盒说明书进行操作。分别检测空质粒组,阴性对照组及IL-8组PCNA的表达情况,然后进行统计学分析。6 HE染色法:检测Hela/hIL-8组、Hela/pcDNA3.1(+)组和Hela组肺转移的发生率。结果:1成功建立Hela/hIL-8细胞、Hela/pcDNA3.1(+)细胞和Hela细胞裸鼠皮下移植瘤模型。2转染IL-8cDNA对裸鼠皮下移植瘤生长的影响:IL-8组成瘤时间为16.00±1.53天,空质粒组成瘤时间为19.90±1.28天,阴性对照组成瘤时间为19.70±1.25天,各组成瘤率均为100%。各组成瘤时间比较有统计学意义(P<0.05)。接种肿瘤细胞后7、8、9周,IL-8组肿瘤生长明显活跃、肿瘤体积也大于空质粒组和阴性对照组,且两两比较有统计学意义(P<0.05)。实验前6周各组肿瘤体积比较无明显差别。3 RT-PCR结果显示:IL-8组、pcDNA3.1(+)组和阴性对照组均有IL-8RA和IL-8RB的表达,各组之间IL-8RAmRNA、IL-8RBmRNA表达相对系数(Ar)无显著差异(P>0.05)。4 PCNA免疫组化结果:IL-8组肿瘤组织内阳性表达明显增加,阳性目标平均光密度值明显高于空质粒组和阴性对照组的平均光密度值(P<0.05)。两两比较结果显示,IL-8组与空质粒组,IL-8组与阴性对照组均有明显差异(P<0.05),空质粒组与阴性对照组之间无明显差异(P>0.05)。5各动物实验组肺组织均未见癌细胞转移。结论:1 Hela细胞裸鼠移植瘤可模拟宫颈癌在体内的状态。2 Hela/hIL-8细胞可显著促进宫颈癌肿瘤组织的增殖。3 IL-8基因可使PCNA表达上调,并通过此途径对宫颈癌细胞起促进增殖作用。4 IL-8可能通过与受体IL-8RA及IL-8RB结合的途径促进宫颈癌组织的生长,但IL-8并不能促进其受体高表达。5 PCNA可能作为一种新的肿瘤标志物应用在宫颈癌的早期筛查、诊断、治疗及预后判断中。6 IL-8基因有望成为宫颈癌基因治疗的靶点。