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MADS-box基因是一个大的转录因子家族,在花发育过程中起着重要作用。根据对模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana)和金鱼草(Antirrhinum majus)遗传突变体的研究,提出了花发育的ABCE模型。该模型认为:A、B、C、E代表了4类功能不同的花器官特征基因,单独或联合控制花器官的发育。由于豌豆花发育具有特殊性,在花原基起始过程中有四个共同原基(common primordial,CP)出现,再由共同原基产生花瓣和雄蕊,参与豌豆花发育的ABCE同源基因是否也有相应的特殊性是值得探讨的问题。
目前,在植物发育生物学研究中,对豌豆等很多难转化植物基因功能的研究总是因为缺乏快速有效的方法而受到限制。在本研究中,我们利用一种反向遗传学快速研究基因功能的方法一病毒诱导的基因沉默技术(Virus Induced Gene Silencing,VIGS),研究了豌豆的几个MADS-box基因的功能。获得以下结果:
1.豌豆中PsPI基因沉默后,出现了类似于拟南芥pi突变体/金鱼草glo突变体的表型,导致花瓣向萼片以及雄蕊向心皮转变,表明PsPI基因具有拟南芥PI/金鱼草GLO同源基因的功能,这说明这类基因在进化和功能上是相当保守的。
2.豌豆中PsSEP1/2基因沉默后,导致花器官第四轮决定性丧失,区别于拟南芥,提示E类基因在功能进化上可能发生了岐化。
3.其余几个MADS-box基因沉默后没有出现相对应的沉默表型,提示这些基因可能存在功能冗余。
4.MADS-box基因保守区VIGS构建的结果提示豌豆中通过沉默保守区研究整个基因家族对花发育的影响应该是可行的。
5.对PsPI和PsSEP1/2基因串联构建能出现双基因沉默的叠加表型,提示利用VIGS进行多基因功能研究是可行的。
6.利用mRNA原位杂交技术对四个豌豆MADS-box基因表达模式的分析,验证了MADS-box同源基因在豌豆花发育中的功能。
以上结果说明豌豆MADS-box基因在功能上既保守又存在岐化,同时也表明VIGS是一种研究植物基因功能的快速有效的方法,特别是对于那些转化困难的非模式植物基因功能的研究具有更为重要的意义。