【摘 要】
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蜱是常见的外寄生虫,叮咬家畜,传播疾病。开发抗蜱疫苗被认为是最优抗蜱策略之一。蜱行开管式循环,以血淋巴运送物质、抵御病原、营养器官,但其蛋白成分尚不明确。本研究以断肢法采集褐黄血蜱血淋巴,进行SDS-PAGE电泳,发现其蛋白质相对质量在10-130k Da;以液相色谱法-串联质谱技术（LC-MS/MS）进行检测,并搜索褐黄血蜱中肠转录组文库获得特异性肽段和推定性多肽,上传多肽序列至Uniprot,
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蜱是常见的外寄生虫,叮咬家畜,传播疾病。开发抗蜱疫苗被认为是最优抗蜱策略之一。蜱行开管式循环,以血淋巴运送物质、抵御病原、营养器官,但其蛋白成分尚不明确。本研究以断肢法采集褐黄血蜱血淋巴,进行SDS-PAGE电泳,发现其蛋白质相对质量在10-130k Da;以液相色谱法-串联质谱技术（LC-MS/MS）进行检测,并搜索褐黄血蜱中肠转录组文库获得特异性肽段和推定性多肽,上传多肽序列至Uniprot,终而鉴定蛋白152个,其中高可信蛋白（Unique peptides≥2）135个。基于功能,可将高可信蛋白分为转运蛋白类、细胞骨架蛋白类、免疫相关蛋白类、抗凝血类、酶类、蛋白质合成转运相关类、信号转导类、蛋白酶抑制剂类、分泌蛋白类、未鉴定蛋白类等12种,其中转运蛋白类最多,细胞骨架蛋白类次之。α-mannosidase是血淋巴主要蛋白成分之一,由Unigene-3609编码。比对显示,Unigene-3609缺失了5’和3’端。基于既有序列设计引物,RACE法克隆其两翼序列,拼接获得了α-mannosidase基因全长,为3504bp,其中ORF框2709bp,编码蛋白903aa且无信号肽。RT-q PCR法检测α-mannosidase基因在不同组织和饱血状态下的m RNA表达,结果发现,饱血状态下表达水平卵巢>唾液腺>体壳;卵巢和唾液腺的表达水平均随血餐增加而上调;体壳的表达水平随血餐增加而下调。研究结果表明,褐黄血蜱血淋巴中蛋白质种类丰富,可为筛选蜱保护性抗原提供物质基础,α-mannosidase基因在不同组织和饱血状态下的差异表达提示其可能参与蜱吸血消化过程,有作为候选抗原潜质。
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