论文部分内容阅读
目的探讨PCDH8基因表达对鼻咽癌细胞体外增殖、周期、侵袭、药物敏感性等生物学行为的影响及其机制研究。方法采用脂质体介导将质粒pcDNA3.1-PCDH8(实验组)与质粒pcDNA3.1(对照组)转染至鼻咽癌细胞株CNE-1,应用RT-PCR、Westernblot技术检测转染后CNE-1细胞中PCDH8mRNA及蛋白的表达情况;通过CCK-8细胞生长曲线试验,流式细胞周期试验,Transwell侵袭试验、CCK-8细胞药物敏感性试验及裸鼠皮下种植瘤模型,进一步对转染PCDH8基因的细胞株CNE-1的增殖能力、生长周期、细胞侵袭能力、对化疗药物的敏感性及其体内成瘤能力进行分析,并与转染对照质粒的细胞株进行对比。通过Real time PCR检测实验组与对照组MMP-9、MMP-2、VEGF基因mRNA水平表达变化,Western blot检测实验组与对照组CDK-4、P21、P27、JNK基因蛋白水平表达变化,了解PCDH8基因在鼻咽癌细胞内的作用机制。结果①RT-PCR、Western blot检测表明转染质粒pcDNA3.1-PCDH8的实验组细胞株中PCDH8mRNA及蛋白成功表达并明显高于转染质粒pcDNA3.1的对照组细胞株(P<0.05)。②CCK-8细胞生长曲线试验表明试验组细胞株的生长速度明显低于对照组(P<0.05)。③流式细胞周期试验检测实验组细胞株G0/G1期较对照组增加,S期细胞较对照组减少(P<0.05);④Tramswell侵袭试验表明实验组细胞株侵袭能力明显低于对照组(P<0.05)。⑤CCK-8细胞药物敏感性试验表明PCDH8基因表达能显著提高鼻咽癌细胞株CNE-1对顺铂化疗药物的敏感性(P<0.05);⑥裸鼠鼻咽癌皮下移植瘤模型中表达PCDH8基因的实验组CNE-1细胞的成瘤能力低于对照组CNE-1细胞(P<0.05)。⑦Realtime PCR试验证明在mRNA水平上MMP-9在实验组的表达量低于对照组(P<0.05),而MMP-2、VEGF在实验组的表达量与对照组无明显差别(P>0.05);⑧Western bolt试验中CDK-4、P27、JNK基因在实验组中的表达高于实验组的表达(P<0.05)。P21在实验组中的表达高于对照区但差异无统计学意义(P>0.05)。结论脂质体成功介导pcDNA3.1-PCDH8与pcDNA3.1质粒转染入鼻咽癌CNE-1细胞株并建立稳定细胞株。PCDH8基因的表达能降低CNE-1细胞的增殖、侵袭能力,延缓细胞分裂周期,提高对顺铂化疗药物的敏感性,降低鼻咽癌细胞体内成瘤能力。PCDH8基因可能通过MMP-9、CDK-4、P27、JNK基因及相关通路,作用于鼻咽癌细胞,在抑癌方面起到一定作用。