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目的:NKG2D是介导NK细胞识别和溶解肿瘤细胞的主要活化型受体,表达于所有的NK细胞表面。NKG2D的配体在多种肿瘤细胞上表达,其在视网膜母细胞瘤的表达尚未见报道。本研究通过检测RB细胞上NKG2D配体的表达情况,及超声微泡介导P53基因转染RB细胞后NKG2D配体表达的变化,探讨抑制肿瘤途径中诱导肿瘤凋亡和免疫杀伤两者之间是否存在协同作用,为RB的免疫研究提供新思路。方法:1.以K562细胞为RB细胞的对照组,采用RT-PCR法检测RB、K562细胞表面NKG2D配体的表达情况。2.以Ficoll密度梯度离心法分离的外周血单个核细胞(PBMC)作为效应细胞,RB和K562细胞作为靶细胞,MTT法检测NK细胞对RB、K562细胞的杀伤活性。3.以0.5W/cm~2声强、辐照时间30s、连续波辐照超声微泡携带wtp53基因转染RB细胞。4.RT-PCR法检测转染基因组和空质粒组二组细胞表面NKG2D(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)配体的表达变化。5.流式细胞仪检测转染组与空质粒组RB细胞的凋亡情况。结果:1、K562细胞上表达NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3;RB细胞上表达NKG2D配体MICA、MICB、ULBP2、ULBP3,不表达ULBP1。K562、RB细胞表面NKG2D的配体mRNA表达强度平均光密度比值K562细胞明显强于RB细胞(P＜0.05)。MTT结果显示,在各效靶比时NK细胞对K562细胞的杀伤活性较RB细胞明显增强(P＜0.05)。2、转染P53基因后,RB细胞上表达MICA、MICB、ULBP2,不表达ULBP1、ULBP3,且转染抑癌基因后NKG2D配体的表达较转染前明显下调。转染P53基因后RB细胞凋亡增加。结论:1、NKG2D配体可在视网膜母细胞瘤细胞上表达。2、NKG2D配体影响NK细胞对靶细胞的杀伤活性,NKG2D的配体表达水平可能决定着NK细胞抗肿瘤免疫应答的强弱,提高NKG2D配体的表达有可能提高NK细胞的抗肿瘤作用。3、转染P53基因后肿瘤细胞凋亡增加,同时下调NKG2D的配体在肿瘤细胞的表达。