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目的:
半乳糖凝集素-1(Galectin-1,Gal-1)是一种分布广泛、调节精细的半乳糖结合蛋白,参与细胞的粘附、增殖、凋亡和炎症反应等多种生理病理过程,在肿瘤发生发展中发挥重要作用。研究发现,Gal-1在多种肿瘤组织中高表达并与肿瘤侵袭及获得转移表型相关。舌鳞状细胞癌(squamouscellcarcinomaoftongue,TSCC)是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤,容易发生局部浸润和颈淋巴结转移。Gal-1在TSCC中的作用目前尚不明确。本课题采用免疫组织化学法检测TSCC组织中Gal-1的表达,并探讨Gal-1与TSCC临床病理因素的相关性,以期为Gal-1作为舌癌诊断和治疗的新靶点提供实验依据。
方法:
1.临床病理资料收集整理
收集并整理2008年至2010年间在山东大学齐鲁医院口腔颌面外科进行手术治疗术前未行放化疗及生物治疗等其他治疗的36例TSCC(经病理证实)患者的石蜡标本及临床病理资料。
2.免疫组织化学染色
对石蜡标本采用免疫组织化学SABC法检测各标本舌鳞状细胞癌组织中Gal-1蛋白表达水平及淋巴细胞浸润程度。
3.染色结果判定
采用双盲法进行染色结果判定,胞浆出现清晰棕黄色颗粒为阳性,记录阳性细胞的着色强度并观察阳性细胞数占所观察同类细胞数的百分比,采用半定量判断标准进行计分。每张切片选取有代表性的5个高倍视野,根据着色强弱分为:阴性0分,弱表达1分,中等强度表达2分,强表达3分;根据阳性细胞占所观察同类细胞的百分比分为:<5%为0分,5%-10%为1分,11%-50%为2分,51%-80%为3分,>80%为4分。两项得分相乘≤4为低表达,>4为高表达。
4.淋巴细胞浸润程度的判定
观察癌组织间质中的淋巴细胞数:显微镜放大200倍时,目镜的细胞数计数网格大小为一个计数单位,在相同条件下每张载玻片随机选取5个200倍视野,计数每个观察单位内的淋巴细胞数,取其均值作为该载玻片的淋巴细胞数。淋巴细胞数≤50为少量淋巴细胞浸润,>50为大量淋巴细胞浸润。大量淋巴细胞浸润为Ⅰ°;少量淋巴细胞浸润为Ⅱ°。
5.临床病理资料及免疫组化结果分析
本实验所得数据采用Stata11.0统计软件包进行数据分析处理。使用Fishers确切概率法比较Gal-1表达强度在TSCC不同临床病理指标中的差异,分析Gal-1表达与临床病理参数之间的关系,使用单因素Logistic回归分析相关临床指标和淋巴结转移(Lymphocytenodemetastasis,LNM)危险性之间的关系,P<0.05为差异有统计学意义。
结果:
1.临床资料收集并整理。
收集并整理2008年至2010年间在山东大学齐鲁医院口腔颌面外科行手术治疗术前未行放化疗的36例TSCC(经病理证实)患者的石蜡标本及临床资料。其中男26例(72%),女10例(28%),31-76岁,中位年龄55岁。临床分期采用美国癌症联合委员会(AJCC,2010)TNM分期系统,Ⅰ/Ⅱ期20例,Ⅲ/Ⅳ期16例。组织学分级根据2005年WHO标准进行,其中G1患者22例,G2及G3患者14例。经术后病理证实有区域(颈部)淋巴结转移13例,未转移23例。另外,取10例癌旁正常黏膜组织作为对照。
2.免疫组织化学染色。
免疫组织化学染色见肿瘤细胞及肿瘤相关基质细胞呈阳性着色,正常舌黏膜上皮中未见弱阳性着色。Gal-1的表达主要定位于胞浆,亦有部分胞核或胞膜呈阳性着色。
3.TSCC患者Gal-1表达与临床病理因素的关系。
舌鳞状细胞癌组织中Gal-1蛋白表达水平在TNM分期、不同淋巴细胞浸润程度、是否伴有区域(颈部)淋巴转移中具有显著差异(P<0.05),其中,Ⅲ/Ⅳ期患者Gal-1的表达强度显著高于Ⅰ/Ⅱ期患者,差异有统计学意义(P=0.002);淋巴细胞浸润程度为Ⅱ°的肿瘤组织中Gal-1表达较淋巴细胞浸润程度为Ⅰ°者强,差异有统计学意义(P=0.025);发生区域(颈部)淋巴转移者(pN1)的Gal-1的表达显著高于未发生区域(颈部)转移者(pN0),差异有统计学意义(P=0.033);而在不同性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小的表达无明显差异(P>0.05),不同性别(P=0.026)、年龄(P=0.175)、肿瘤部位(P=0.468)、肿瘤大小(P=0.674)患者组间Gal-1的表达强度差异无统计学意义。
4.相关临床病理指标和区域(颈部)淋巴结转移(Lymphocytenodemetastasis,LNM)危险性的关系
舌鳞状细胞癌组织中Gal-1蛋白表达水平、组织学分级是区域(颈部)淋巴结转移的危险性因素,危险性分别为3.469、1.069,具有统计学意义(P<0.05);而年龄、性别、肿瘤大小不是区域(颈部)淋巴结转移危险性因素(P>0.05)。
结论:
Gal-1在TSSCC组织及肿瘤相关基质中的表达与肿瘤的侵袭及转移相关,可望成为舌癌诊断和治疗的新靶点。