【摘 要】
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目的:探讨mi R-877-5p靶向CDKN1B在LPS诱导的HPMECs及CLP诱导的ARDS小鼠模型中的作用及其作用机制。方法:1.建立LPS诱导的HPMECs,转染mi R-877-5p mimic NC、mi R-877-5p mimic、mi R-877-5p inhibitor NC、mi R-877-5p inhibitor;感染Lv-NC、Lv-CDKN1B后,使用q RT-PCR
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目的:探讨mi R-877-5p靶向CDKN1B在LPS诱导的HPMECs及CLP诱导的ARDS小鼠模型中的作用及其作用机制。方法:1.建立LPS诱导的HPMECs,转染mi R-877-5p mimic NC、mi R-877-5p mimic、mi R-877-5p inhibitor NC、mi R-877-5p inhibitor;感染Lv-NC、Lv-CDKN1B后,使用q RT-PCR检测各组的mi R-877-5p或CDKN1B表达情况,并通过ELISA检测炎症因子白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-6和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达水平,利用流式细胞学技术评估mi R-877-5p、CDKN1B及mi R-877-5p靶向CDKN1B对HPMECs凋亡的影响,通过划痕实验及Transwell实验评估HPMECs的迁移功能改变,采用免疫荧光实验检测mi R-877-5p对CDKN1B荧光表达的调控及细胞定位的影响,并用Western blot法检测各组HPMECs的p-Akt等PI3K/Akt信号通路相关蛋白分子的表达水平;2.建立CLP诱导的ARDS小鼠模型,转染ago-mi R-877-5p NC、ago-mi R-877-5p mimic;感染Lv-NC、Lv-CDKN1B,使用q RT-PCR进行各组小鼠血清或肺组织mi R-877-5p、CDKN1B的蛋白及m RNA表达水平测定,并使用ELISA检测各组炎症因子表达,随后进行肺组织学评估,并采用Western blot法检测各组小鼠肺组织中p-Akt等PI3K/Akt信号通路相关蛋白分子的表达水平。结果:1.LPS处理HPMECs后,mi R-877-5p的表达降低,CDKN1B的m RNA及蛋白表达升高。LPS处理的HPMECs中炎症因子IL-1β,IL-6与TNF-α表达水平升高,HPMECs增殖和迁移功能被抑制,HPMECs凋亡水平增高,p-Akt蛋白表达降低。转染mi R-877-5p mimic后,CDKN1B的m RNA及蛋白表达降低,炎症因子IL-1β,IL-6与TNF-α表达水平下降,HPMECs增殖和迁移功能恢复,HPMECs凋亡水平降低,p-Akt蛋白表达升高。我们的结果还提示感染Lv-CDKN1B后,HPMECs中炎症因子IL-1β,IL-6与TNF-α表达水平升高,HPMECs增殖和迁移功能被抑制,HPMECs凋亡水平增高,p-Akt蛋白表达降低;2.CLP诱导的ARDS小鼠模型中mi R-877-5p的表达降低,CDKN1B的m RNA及蛋白水平增高。CLP诱导的ARDS小鼠外周血中炎症因子IL-1β,IL-6与TNF-α表达水平升高、肺组织病理学改变（表现为肺泡正常结构遭破坏,炎性细胞浸润增多,肺水肿）。p-Akt蛋白表达水平降低。转染ago-mi R-877-5p mimic后,CDKN1B的m RNA及蛋白水平降低,CLP诱导小鼠外周血中炎症因子IL-1β,IL-6与TNF-α表达水平降低,肺组织炎性损伤降低,p-Akt蛋白表达水平升高。我们的结果还提示,CLP诱导小鼠转染ago-mi R-877-5p mimic基础上再感染Lv-CDKN1B,可以逆转ago-mi R-877-5p mimic对小鼠肺组织的保护作用及PI3K/Akt信号通路的激活作用。主要表现为,小鼠外周血炎症因子IL-1β,IL-6与TNF-α表达增高、小鼠肺组织炎性损伤加重、肺组织炎性细胞浸润增多、正常肺泡结构被破坏、p-Akt蛋白表达降低。
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