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新孢子虫病(Neosporiasis)是由犬新孢子虫(Neospora caninum)寄生于多种动物细胞内而引起孕畜流产、死胎以及新生胎儿运动神经系统紊乱的一种原虫病。该病对牛的危害尤为严重,已经给养牛业造成了巨大的经济损失。而目前尚未有有效的治疗药物和疫苗来控制该病的发生和发展,因此疫苗的研究是当前研究新孢子虫病的热点问题。本试验根据GenBank中已发表的犬新孢子虫SAG1基因的核苷酸序列(AF132217),设计、合成了一对含有Kozak序列、起始密码子、终止密码子、Bam HⅠ和Eco RⅠ酶切位点的特异性引物,采用PCR技术扩增犬新孢子虫SAG1基因片段,克隆到pMD18-T simple载体上,进行PCR、酶切鉴定及序列分析。将鉴定正确的SAG1基因片段克隆至pVAXl真核表达载体中,PCR、酶切鉴定及序列分析后转染至BHK21细胞,应用IFAT和RT-PCR方法检测重组质粒在BHK21细胞中表达情况。最后将提取重组质粒pVAX-SAG1免疫BALB/c小鼠,应用间接ELISA和流式细胞技术检测体液免疫水平和细胞免疫水平。结果表明,克隆的SAG1基因片段长780bp,编码260个氨基酸,与已发表的美国株犬新孢子虫SAG1基因核苷酸序列(AF132217)的同源性为99%,氨基酸序列同源性为98.8%。IFAT和RT-PCR证实重组质粒在BHK21细胞中获得表达。表达的重组质粒pVAX SAG1免疫BALB/c小鼠后,诱导产生的体液免疫水平显著高于空载体pVAX1免疫组和PBS对照组,差异极显著(P＜0.01),诱导产生的细胞免疫水平与PBS对照组差异显著(P<0.05)。本试验为新孢子虫核酸疫苗的研制开辟了一条新的途径。