【摘 要】
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香蕉枯萎病是由尖孢镰刀菌古巴专化型引起的毁灭性的土传维管束香蕉真菌病害,已经对全球香蕉产业造成严重影响。由于香蕉抗性栽培品种的缺乏,以及对病原菌致病分子机理和香蕉
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香蕉枯萎病是由尖孢镰刀菌古巴专化型引起的毁灭性的土传维管束香蕉真菌病害,已经对全球香蕉产业造成严重影响。由于香蕉抗性栽培品种的缺乏,以及对病原菌致病分子机理和香蕉抗性分子机制的不清楚等原因,目前还没有真正十分有效的防治方法。为了阐明香蕉枯萎病菌的致病分子机理,为香蕉抗病品种培育提供方向及防治药物开发提供靶标,本文从香蕉枯萎病菌4号(Foc4)和1号小种(Foc1)的比较蛋白质组分析出发,选取了 9个在Foc1和Foc4中差异表达的潜在致病相关蛋白,进行了基因克隆,并运用荧光定量PCR方法进行基因表达分析。选取酰胺转移酶基因构建基因敲除载体,进行了基因敲除和基因功能验证。主要的研究结果如下:1.从尖孢镰刀菌1号小种和4号小种的比较蛋白质组学分析中选择9个差异蛋白,利用荧光定量PCR对基因表达量进行了分析,从中筛选出4个差异表达基因。2.扩增了酰胺转移酶的左右侧同源臂,并成功构建了带GFP(绿色荧光蛋白)标记敲除载体。3.利用PEG介导的原生质体转化法对Foc4菌株进行了基因敲除,获得了 10个带有GFP(绿色荧光蛋白)和HPH(潮霉素磷酸转移酶)标记的转化子。4.通过对转化子的各种验证试验确定,成功获得酰胺转移酶基因敲除子。5.酰胺转移酶敲除子生长和菌落形态与野生型并无明显差异。6.酰胺转移酶敲除子的穿透力与野生型并无明显差异。7.与野生型相比,酰胺转移酶敲除子在中、高浓度的过氧化氢胁迫下,几乎不能生长,对过氧化物耐受性明显减弱。推测酰胺转移酶可能在对抗香蕉抗性反应产生的过氧化物中起作用。8.与野生型相比,酰胺转移酶敲除子的纤维素利用能力有所减弱。9.与野生型相比,酰胺转移酶敲除子对NaCl和山梨醇的耐受性增强。10.酰胺转移酶敲除子不能在离体香蕉叶柄中成功定殖,而野生型对照能够在离体香蕉叶柄中定殖。11.与野生型相比,酰胺转移酶敲除子对巴西蕉的致病力减弱。
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