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牛的结核病是一种动物的慢性传染病，临床上以在肺和其他器官上形成肉芽肿为主要病理特点。这种疾病能够传染奶牛和其他家畜，同时也能感染野生动物。牛的结核杆菌分布于世界各个角落，每年都会引起巨大的经济损失，其中对奶牛的产业化生产影响更为严重。因此发现一种合适的方法降低这种损失变得尤为紧迫和重要。前期的文献证明人的防御素（HBDs）在结核的发展过程中对结核杆菌有一定的抑制作用。因此在本实验中首先纯化了HBD3蛋白并通过大肠杆菌和葡萄球菌测定了其生物学活性，而后验证了HBD3蛋白对结核杆菌的抑制作用。而后构建HBD3真核表达载体，利用体细胞核移植技术获得了转HBD3基因的转基因牛。（1）本文首先纯化了GST-HBD3蛋白，通过Xa酶切后获得纯化的rHBD3蛋白，对其生物学活性鉴定表明其对大肠杆菌无明显的抑制作用，而对金黄色葡萄球菌有显著的抑制作用。（2）使用纯化的rHBD3蛋白对结核杆菌做抗菌性分析，结果表明纯化的HBD3蛋白对结核杆菌最小抑菌浓度为20μg.ml-1，同时结核杆菌对靶细胞侵染时，靶细胞会释放HBD3。（3） Muc1蛋白在牛上的分布表明可以将muc1启动子应用于抗结核研究中，同时Muc1启动子的活性分析表明muc1启动子能够启动绿色荧光蛋白表达,但其表达强度弱于CMV启动子。（4）牛靶细胞细胞系AECs II的建立，通过转入Htert基因获得了转基因的AECsII永生化细胞系，此细胞系与结核杆菌的相互作用表明其可以作为抗结核研究的靶细胞材料。（5）构建了HBD3真核表达载体，将其转入靶细胞中分析细胞中HBD3的表达情况及其抗菌性验证，结果表明，转基因细胞分泌的HBD3蛋白在结核杆菌侵染时极显著升高（P<0.01）。抗菌性实验表明，分泌的HBD3蛋白能够显著地抑制结核杆菌的生长(P<0.05)。同时转基因细胞的荷菌数及凋亡率分析表明其对结核杆菌的易感性降低。（6）比较了转基因胚胎和非转基因胚胎的发育状况，结果表明转基因胚胎的卵裂率和囊胚率与非转基因的胚胎卵裂率和囊胚率无明显差异。生产并鉴定了转基因牛，其抗菌性分析表明转基因牛对结核杆菌有一定的抗性，其肺泡上皮细胞中分泌的HBD3能够抑杀结核杆菌。肺泡上皮细胞的荷菌数表明转基因牛能够显著降低其对结核杆菌易感性。