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目的:
Rho家族蛋白是Ras超家族小分子量G蛋白成员,近来许多研究表明Rho家族成员在多种肿瘤细胞中表达并参与了恶性肿瘤的发生和发展,与恶性肿瘤的侵袭转移密切相关。而RhoC作为Rho家族蛋白的重要一员,也与多种恶性肿瘤的侵袭转移密切相关。Y-27632为Rho激酶的特异性抑制剂,可有效抑制Rho蛋白参与的信号转导途径。
本研究应用免疫组化法检测RhoC在结直肠癌组织及结直肠癌细胞株SW480中的表达,并结合临床病理资料探讨其在结直肠肿瘤转移中的意义。并将SW480细胞经Rho激酶抑制剂Y-27632处理后,分析其对结直肠癌细胞运动、黏附、迁移和侵袭能力的影响。
材料与方法:
1、利用免疫组化法检测RhoC在48例结直肠癌组织、16例癌旁正常粘膜、19例淋巴结转移组织中的表达情况,并结合临床病理资料探讨其在结直肠肿瘤转移中的意义。
2、用RT-PCR检测Rho家族分子(RhoA和RhoC)在SW480细胞中是否有表达,SW480细胞用Rho激酶抑制剂Y-27632处理后,分别用细胞运动实验,黏附实验和迁移、侵袭实验分析对肿瘤细胞运动、黏附、迁移和侵袭能力的影响。
结果:
1、RhoC蛋白在16例癌旁正常粘膜组织中有2例呈阳性表达,占12.50%;在48例结直肠癌组织中有31例呈阳性表达,占64.58%:而在19例淋巴结转移组织中有17例呈阳性表达,占89.47%,三组间比较差异有统计学意义(p<0.05)。
2、RhoC蛋白的表达与结直肠癌的浸润深度、临床分期和有无淋巴结转移相关,而与病人的年龄、性别、肿瘤细胞分化程度无相关性。
3、RT-PCR显示Rho家族分子RhoA和RhoC在SW480细胞均有表达。25μM以上的浓度的Rho激酶抑制剂Y-27632作用于SW480细胞后,细胞的的运动能力、迁移能力明显下降(p<0.05);细胞黏附于纤维粘连蛋白的能力也降低(p<0.05);而且细胞穿过人工基底膜的能力明显降低(p<0.01)。
结论:
1、RhoC蛋白在结直肠癌组织中的表达高于在癌旁正常组织中的表达,而在淋巴结转移组织中的表达又高于在结直肠癌组织中的表达,结合临床病理资料分析,RhoC蛋白的表达与结直肠癌的浸润深度、临床分期和有无淋巴结转移相关。
2、SW480细胞中有Rho家族分子表达,Rho激酶抑制剂Y-27632能降低结肠癌SW480细胞的侵袭转移能力,更进一步说明Rho家族参与恶性肿瘤的侵袭转移。