目的：免疫实验技术是从事免疫研究工作的基石,是实验进度得以维持的保证。因此我把建立免疫实验技术做为自己硕士研究生期间的重要工作。在三年的学习工作中,我主要建立了三套免疫实验技术,它们分别为：小鼠γδT细胞的体外扩增技术；小鼠小肠上皮淋巴细胞(i-IELs)的分离技术以及免疫荧光技术在肿瘤微环境研究中的应用。1.小鼠γδT细胞的体外扩增技术主要解决的是小鼠外周淋巴系统中γδT细胞稀少,无法获得足够的细胞用以完成小鼠淋巴细胞回输重构实验的问题。使用的方法是利用抗γδTCR和CD28的抗体包板,在IL-2的协同下对γδT细胞进行刺激,从而实现体外增殖。2.小鼠小肠上皮淋巴细胞(i-IELs)的分离技术主要解决的是无法有效研究肠道上皮中γδT细胞的问题。方法依赖在缺氧环境下,小肠上皮容易脱离且EDTA具有螯合钙、镁离子的特性,通过物理方法完成小鼠小肠上皮淋巴细胞(i-IELs)的分离。分离得到的细胞可以按照实验要求进行后续实验。3.免疫荧光技术主要解决的是研究Vγ1γδT细胞和Vγ4γδT细胞在皮下黑色素瘤中共定位的问题。问题的主要难点在于：皮下黑色素瘤的摘取,组织的预处理,冰冻切片的最适温度以及荧光抗体的选择。通过解决这一技术问题,不仅满足了研究γδT细胞亚群在皮下黑色素瘤中定位的需要,还满足了研究CD4阳性T细胞,CD8阳性T细胞以及树突状细胞在其他类型肿瘤中的浸润情况的需求。