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目的: 1.确定白藜芦醇(resveratrol,Res)是否可以诱导人T淋巴瘤Jurkat细胞进入凋亡;描述该细胞凋亡具体情况,包括细胞膜、细胞核、染色体、凋亡小体、空泡以及细胞器等的变化。 2.定量检测并分析该细胞凋亡时对药物的时间和剂量依赖情况,以及增殖活性、细胞周期变化情况等; 3.初步探索该细胞系凋亡机理,了解相关基因(β-actin、bax、caspase-3、bcl-2、BCL-XL、AIF等)的表达以及对凋亡的调控情况,探索该细胞系在该药物诱导下的凋亡通路。 方法: 本实验通过Jurkat细胞培养,按预设方案添加Res处理细胞样品;主要通过核酸电泳检测DNA变化情况,并初步推断细胞凋亡时间;运用荧光显微镜技术,Wright-Giemsa染色以及电子显微镜来检测并分析凋亡的形态变化、事件发生时间等;运用流式细胞技术、MTT法定量检测并分析该细胞对药物的时间、剂量依赖性及增殖活性、细胞周期变化等;运用蛋白印迹技术(Western blotting)检测凋亡的相关因子的表达变化及可能的凋亡路径。 结果: 1.Res诱导人T淋巴瘤Jurkat细胞凋亡,显示典型的凋亡特征,包括:DNA Ladder现象;染色质高度凝聚形成致密质块,凝聚的染色质出现边聚化现象;胞浆浓缩而出现空泡结构;线粒体膨大、内质网扩张但结构均完整;核膜凹陷然后逐渐破裂;细胞形成若干个仍由质膜包裹凋亡小体;等。 2.Res诱导人T淋巴瘤Jurkat细胞凋亡,在一定范围内呈现剂量和时间依赖性,且Res可以阻滞该细胞系于G0/G1期,使细胞分裂、增殖进度受抑。 3.研究发现,Res诱导人T淋巴瘤Jurkat细胞12h时,细胞已进入凋亡途径,24h时已有相当数量的Juekat细胞进入凋亡后期,经过48h时绝大多数细胞进入凋亡后期,也就是说Res诱导Jurkat细胞系凋亡的时间依赖性在48h以内,以后随时间延长抑制效果会逐渐减弱。 4.研究发现,0.2mmol/L的Res浓度在24h内可以使初始浓度为30ml/皿×10~5个/ml Jurkat细胞32.88%凋亡,生长抑制率达到59.84%。也即Res在低浓度下就可以抑制Jurkat细胞增殖,诱导Jurkat细胞凋亡。 5.Res诱导人T淋巴瘤Jurkat细胞凋亡,通过caspase-3的激活而导致凋亡,Res抑制了Bcl-xl的表达,却没有影响促凋亡因子Bax、AIF,这样就可以激活下游信号分子,最终进入凋亡通路。