论文部分内容阅读
研究目的通过研究初始治疗的乙型肝炎病毒(HBV)相关慢加急性肝衰竭(ACLF)患者外周血调节性T细胞(Treg细胞)及血清中促炎抗炎细胞因子表达和动态变化,探讨外周血Treg细胞、血清中促炎抗炎细胞因子在初始治疗的HBV相关ACLF患者疾病进程中的临床意义。研究方法入组44例HBV相关ACLF患者、46例慢性乙型肝炎(CHB)患者、20例健康对照者,采用流式细胞仪检测外周血Treg细胞频率、CD39+Treg细胞频率、CTLA-4+ Treg细胞频率,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-10、转化生长因子(TGF)-β1、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,同时检测各项临床指标。采用免疫组织化学法检测5例HBV相关ACLF患者、6例CHB患者、3例健康者Foxp3+细胞在肝组织内表达情况。对上述44例HBV相关ACLF患者进行为期3周的随访,动态观察外周血Treg细胞频率、CD39+Treg细胞频率、CTLA-4+Treg细胞频率,血清IL-1β水平、IL-6水平、IL-10水平、TGF-β1水平、TNF-a水平的变化趋势。结果HBV相关ACLF组外周血Treg细胞频率(5.69%±1.83%)、CD39+Treg细胞频率(49.55%±25.01%)、CTLA-4+Treg细胞频率(35.27%±12.28%)均高于CHB组(4.56%±1.59%,P<0.01;36.10%±20.65%,P<0.01；28.99%±10.59%,P<0.01)、健康对照组(2.64%±0.42%,P<0.01；19.67%±9.09%,P<0.01；24.52%±7.52%,P<0.01)。HBV相关ACLF组肝组织内Foxp3+细胞在汇管区(19.53hpf±9.47hpf)、肝小叶(9.93hpf±2.51hpf)表达均高于CHB组(3.39hpf±1.12hpf, P<0.01; 0.72hpf±0.65hpf, P<0.01).健康对照组(0.22hpf±0.19hpf, P<0.05; 0.11hpf±0.19hpf, P<0.01)。HBV相关ACLF组血清中IL-1β(9.33pg/ml±6.85pg/ml)、IL-6 (20.90pg/ml±23.44 pg/ml)、IL-10 (8.48pg/ml±6.42pg/ml)、TGF-β1 (426.23pg/ml±296.36pg/ml)水平均高于CHB组(5.27pg/ml±5.45 pg/ml, P<0.01; 3.79pg/ml±4.09pg/ml, P<0.01; 4.34pg/ml±2.50 pg/ml, P<0.01; 181.91pg/ml±82.23pg/ml,P<0.01)、健康对照组(2.20pg/ml±1.11 pg/ml, P<0.01; 1.35pg/ml±1.55pg/ml, P<0.01; 2.83pg/ml±1.86pg/ml, P<0.01; 212.12 pg/ml±108.24pg/ml, P<0.01), HBV相关ACLF组血清中TNF-a水平(12.19pg/ml±10.32pg/ml)高于健康对照组(6.67pg/ml±4.32pg/ml,P<0.05)。HBV相关ACLF中期组、晚期组外周血CD39+Treg细胞频率(53.83%±26.62%,P<0.05；52.88%±23.24%,P<0.05)、血清IL-1β水平(11.41pg/ml±7.64pg/ml,P<0.01；9.08pg/ml±6.03pg/ml,P<0.05)均高于早期组(25.44%±8.73%;3.58pg/ml±2.55pg/ml),中期组血清TGF-p1水平(534.91pg/ml±347.19pg/ml)高于早期组(220.67pg/ml±86.88 pg/ml,P<0.05).HBV相关ACLF组中Treg细胞频率分别与Cre水平、MELD分值呈正相关(r=O.333,P<0.05;r=0.388,P<0.01),与IL-1β水平呈负相关(r=.0.382, P<0.01)；CD39+Treg细胞频率分别与CTLA-4+Treg细胞频率.TGF-p1水平呈正相关(r=0.487,P<0.01；r=0.325,P<0.05)；IL-6水平分别与IL-10水平、TBIL.Cre水平、MELD分值、MELD-Na分值呈正相关(r=0.367,P<0.05;r=0.470,P<0.01；r=0.454,P<0.01；r=0.520,P<0.01；r=0.506,P<0.01),与Na+呈负相关(r=-0.348, P<0.05);IL-10水平分别与CHE、MELD-Na分值呈正相关(r=0.388,P<0.01;r=0.438, P<0.01),与Na+呈负相关(r=-0.523,P<0.01)；TGF-β1水平与CHE呈正相关(r=0.320,P<0.05)。HBV相关ACLF未完成观察组(n=13)Treg细胞频率(6.72%±1.42%)、IL-6水平(38.43pg/ml±31.84pg/ml).MELD分值(34.9±7.1)、MELD-Na分值(40.62±10.89)基线水平均高于好转组(n=14)(5.39%±2.15%,P<0.05；15.61pg/ml±16.87 pg/ml,P<0.05；24.2±4.3,P<0.01；22.49±6.18,P<0.01)、无效组(n=13)(4.57%±0.93%,P<0.01;13.00pg/ml±11.99pg/ml,P<0.01；24.1±2.5,P<0.01；20.06±7.02,P<0.01),好转组与无效组外周血Treg细胞频率、CD39+Treg细胞频率、CTLA-4+Treg细胞频率,血清IL-1β水平、IL-6水平、IL-10水平、TGF-β1水平、TNF-α1水平、MELD分值、MELD-Na分值基线无统计学差异(P均>0.05)。近期随访过程中的动态观察显示,好转组患者随着病情好转MELD分值、MELD-Na分值呈逐渐下降的趋势,Treg细胞频率呈逐渐上升的趋势,IL-6水平.TGF-β1水平呈逐渐下降的趋势,TNF-α水平呈先短暂上升后逐渐下降的趋势；而无效组患者随着病情加重MELD分值、MELD-Na分值呈逐渐上升趋势,Treg细胞频率呈先短暂上升后逐渐下降的趋势,IL-6水平呈先逐渐上升后短暂下降的趋势,TGF-β1水平呈先逐渐下降后短暂上升的趋势；CD39+Treg细胞频率、CTLA-4+Treg细胞频率、IL-1β水平、IL-10水平在好转组、无效组中均无明显波动。结论HBV相关ACLF患者体内存在细胞免疫失衡及促炎抗炎细胞因子紊乱；外周血Treg细胞及其亚群CD39+Treg细胞、CTLA-4+Treg细胞的频率、IL-1β、IL-6、IL-10、TGF-β1、TNF-α水平在HBV相关ACLF患者体内明显增高；基线外周血Treg细胞频率、IL-6、IL-10水平与HBV相关ACLF患者病情严重程度存在一定的相关性；外周血Treg细胞频率、IL-6水平基线值高的患者预后差；外周血Treg细胞频率IL-6、TGF-β1、TNF-α水平的动态变化与HBV相关ACLF患者预后存在一定的相关性；HBV相关ACLF患者外周血Treg细胞和血清促炎抗炎细胞因子的表达及动态变化为临床观察患者疾病进展和预测近期预后提供了良好的辅助手段。