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牛免疫缺陷病毒(BIV)可以在牛群中自发感染,引起牛免疫系统的紊乱,进而造成一系列次级反应,影响奶牛的产奶量,危害牛群健康。另外该病毒在世界范围内流行,欧洲、北美、亚洲等地牛群中均有发现。BIV包膜蛋白包括表面糖蛋白(SU)gp100和跨膜糖蛋白(TM)gp45。目前,表面糖蛋白的结构区已经确定,但是对于跨膜糖蛋白的研究非常少。
本研究通过NCBI数据库获得BIV包膜糖蛋白(Env)的序列,并通过查阅相关文献,确定跨膜糖蛋白的具体序列。在此基础上,使用生物信息学的方法,结合跨膜区的特征,初步预测有2个区域可能为跨膜区(MSD);然后,与在结构、遗传、生物学性质和致病性等方面与该病毒相似的I型人免疫缺陷病毒(HIV-1)的跨膜糖蛋白相应区域进行比较分析;最后通过一系列细胞亚定位的生物学实验,初步确定了BIV的MSD区为包膜糖蛋白第725~746位氨基酸DWIK(IIIVII)VLWLLIKILLGM。根据env上各基因分布,MSD的5后的区域即为牛免疫缺陷病毒的胞内区(CD)部分。通过序列分析确定CD区后,同样通过类比的方式运用细胞定位的方法确定预测的区域正确。在实验过程中发现整个胞内区转染入细胞后,会造成其在细胞中特定细胞器聚集分布。为了确定引起这种分布的关键区域,本实验构建一系列截短突变,进行细胞亚定位分析,最终确定了2个肽段,即包膜糖蛋白第809~819位氨基酸NSLRILFATCR及第841~849位氨基酸LLWDIFRHA对于该现象具有重要作用。它们的缺失会造成这种现象消失。同时,本研究对Env在细胞中的合成及运输过程中经过细胞器的情况分析,分别对细胞核、内质网、高尔基体进行染色,最终确定这种集中分布主要位于内质网的近核膜端。
跨膜糖蛋白的跨膜区及胞内区对于病毒的生命周期有重要的作用,对于HIV-1中相应区域的功能已有一定的研究。本研究通过生物信息学及生物学实验的方法,对于BIV进行了初步研究,可以丰富和完善人们对慢病毒Env及其功能的认识。同时,Env是病毒感染宿主细胞过程中最先暴露于宿主免疫系统的部分,因此对于它的研究有助于BIV疫苗的研发,从而对于整个畜牧业产量的提高有潜在的价值。