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NF-κB系统几乎存在于所有细胞中，它涉及多种重要的细胞功能的调节，如细胞存活、生长及免疫反应。TNIK对于经典NF-κB信号通路及JNK信号通路都是必须的。故而，TNIK的敲除对多种细胞信号及细胞存活都有巨大的影响。在本研究课题中，我们利用插入氨基末端有Flag标记的TNIK和mTNIK (K56A) cDNA的pShuttle-CMV质粒研究TNIK对于TNFα引起的NF-κB活化是否是必需的。我们还利用腺病毒载体携带靶向TNIK mRNA的shRNA，进行体内体外研究目的病毒Ad-shTNIK对肿瘤的杀伤反应。【实验方法】本研究首先利用western blotting及免疫共沉淀分析TNIK蛋白在HeLa细胞中的表达。通过RNA干扰的进一步研究、western boltting及报告基因活性分析研究TNIK对于TNFα引起的NF-κB活化是否是必需的。其次，运用MTT、结晶紫、Hoechst33342染色法、流式细胞检测法等体外实验研究目的病毒Ad-shTNIK对癌细胞的杀伤作用。最后构建Bel-7404荷瘤小鼠模型和免疫组化实验研究Ad-shTNIK对癌细胞的杀伤作用。【实验结果】通过western blotting及免疫共沉淀分析，发现加入TNFα处理，TNIK出现泛素化及蛋白酶体调节的下调。通过RNA干扰的进一步研究、western boltting及报告基因活性分析可以发现TNIK对由TNFα引起的NF-κB活化是必需的。体外细胞实验结果表明，目的病毒Ad-shTNIK对癌细胞具有很好的杀伤作用，在肿瘤坏死因子TNFα共同刺激下，对癌细胞的杀伤作用更强烈，而对正常细胞基本不具有杀伤作用。体内实验证明，Ad-shTNIK对Bel-7404荷瘤具有良好的治疗效果：实验组裸鼠接受Ad-shTNIK治疗后肿瘤生长受到明显抑制，而注射了PBS或者Ad-shGFP的对照组裸鼠肿瘤生长迅速。HE染色及TUNEL染色实验发现在TNFα刺激下Ad-shTNIK引起的凋亡十分明显。免疫组化实验的结果也证明TNIK对TNFα引起的NF-κB信号通路的激活是必需的。【结论】实验结果表明TNIK对于TNFα引起的NF-κB活化是必需的，Ad-shTNIK对癌细胞具有明显的杀伤反应。TNIK能够作为基因病毒治疗癌症一个新的靶点。