地塞米松对脊髓运动神经元树突可塑性的影响

来源 :河北医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wenlingqiang6268047
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目的:本实验主要采用霍乱毒素B亚单位结合辣根过氧化物酶(CB-HRP)逆行标记、显微描绘管(Camera Lucida)图象描绘和体视学测量的方法,分析比目鱼肌(慢肌)运动神经元群和趾长伸肌(快肌)运动神经元群树突分布和长度的变化;探讨嫌高尔基树突(GBD)与比目鱼肌运动神经元群、趾长伸肌运动神经元群之间的关系;探讨地塞米松对比目鱼肌运动神经元群、趾长伸肌运动神经元群树突的影响。 方法:1.选用36只生后30天的雄性Wistar大鼠进行实验研究。18只大鼠每日肌注生理盐水作为相应对照;另18只每日分别肌注地塞米松(1mg/kg),其中6只至生后40天(P30-40)、12只至生后60天(P30-60)。P30-60地塞米松组及相应对照各6只经灌注固定后,取脊髓腰膨大节段作冰冻切片,以高尔基银染法染色;余者处死前3天,将霍乱毒素B亚单位结合辣根过氧化物酶注射于左侧趾长伸肌和右侧比目鱼肌,经灌注固定后,取脊髓腰膨大节段作冰冻切片,以Mesulam-TMB法呈色。采用显微描绘管绘制上述两种染色切片的树突分布图,以体视学测量法计算白质外侧索树突面密度和计算运动神经元群树突的相对平均长度。2.选用10只生后60天的雄性Wistar大鼠,以Western blot方法对比目鱼肌、趾长伸肌糖皮质激素受体蛋白进行半定量分析。 结果: 1.高尔基染色: 对照组肌注生理盐水P30-60的大鼠,脊髓灰白质分界明显,灰质内可见神经元胞体及树突,白质内未见树突存在;实验组肌注地塞米松P30-60的大鼠脊髓灰质内,白质内仍未见神经元树突;利用体视学测量方法测得的神经元树突相对平均长度对照组为5360.37±452.39μm,实验组为8650±2367.04μm,P<0.01。比对照组大鼠增加了约61.36%。 2.TMB成色: 1)与高尔基染色切片相比,霍乱毒素B亚单位结合辣根过氧化物酶染色切片的脊髓白质外侧索,可见较多的白质树突,甚至达软膜下的树突存在,即嫌高尔基树突;而高尔基染色切片则未见这些树突的存在。 2)P30-4O、P30-60对照组,趾长伸肌运动神经元群树突主要沿灰白质交界处呈背腹相反走行,向白质外侧及腹外侧方向延伸的树突很少。与之相比,比目鱼肌运动神经元群树突的分布范围较广,外侧索白质树突丰富,且多超过白质三分之二。可见软膜下树突存在。P30-40、P30-60实验组的大鼠,可见趾长伸肌运动神经元群白质外侧索树突多于对照组,多数树突超过白质的三分之二,甚至可达软膜下。P30-40、P30-60实验组大鼠白质外侧索的面密度明显高于相应对照组,分别为66.07%,29.89%,P30-40对照组1.1 2±0.60,P30-40实验组.1.86±0.84,P<0.01;P30-60对照组1.84±0.90,P30-60实验组2.39±0.97,P<0.01。P30-40、P30-60实验组比目鱼肌运动神经元群树突与P30-40、P30-60对照组相比外侧索白质树突面密度无明显区别,P30-40对照组1.04±0.64,P30-40实验组1.01±0.66,P>0.05;P30-60对照组1.92±0.78,P30-60实验组1.90±1.15,P>0.05。P30-40、P30-60实验组大鼠趾长伸肌运动神经元群树突相对平均长度比P40、P60对照组大鼠明显增长约30.51%、92.54%,P30-40对照组9234.78±4792.60μn,P30-40实验组12052.07±6725.04μm;P30-60对照组7100.19±3197.24μm,P30-60实验组13671.31±5089.73μm,P<0.01:但地塞米松对趾长伸肌运动神经元群树突生长的这种促进作用在比目鱼肌运动神经元群树突上表现不明显,P30-40对照组10971.61±6426.26μm,P30-40实验组12894.02±7322.21μm,P>0.05;P30-60对照组11801.71±5380.82μm,P30-60实验组15608.16±6509.27μm,比对照组增加了32.26%,P<0.01。 3.Western blot结果: 用美国UVP公司LabWorks 4.5软件对Western条带进行定量分析比目鱼肌、趾长伸肌的糖皮质激素受体蛋白含量,趾长伸肌中糖皮质激素受体蛋白含量高于比目鱼肌,糖皮质激素受体与β-actin条带相对吸光度值的比值在趾长伸肌组大鼠为0.0906±0.0094,比目鱼肌组大鼠为0.0367±0.004.5,P<0.05,两组相比,有显著性差异。 结论: 1.嫌高尔基树突(GBD)的确存在;支配张力性肌肉的运动神经元(比目鱼肌运动神经元)群具有较丰富的嫌高尔基树突。 2.地塞米松明显影响大鼠趾长伸肌运动神经元群树突的可塑性,改变其树突分布方式,促进白质树突(white matterdendrites,WMD)增长;地塞米松对比目鱼肌运动神经元群树突可塑性的影响较小。 3.趾长伸肌的糖皮质激素受体含量明显高于比目鱼肌,地塞米松明显影响大鼠趾长伸肌运动神经元群树突的可塑性可能与此有关。
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