西红花资源生物学与利用技术的研究

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西红花(Crocus sativus Linn.)是鸢尾科番红花属球根类多年生药用植物,对其生态习性、遗传多样性、柱头中活性成分已有较多的研究报导,但对不同种质特性及活性成分影响因素的研究报导较少,同时,对于同属的观赏西红花的生态习性、园林绿化、遗传多样性及活性成分种类等方面也缺少了解。为此,本试验采用形态学调查与分子生物学等实验技术对不同西红花种质资源的生物学特性、遗传多样性及亲缘关系等进行了研究,优化了西红花苷-1的高效液相色谱(HPLC)测定技术,并分析了5种药用西红花柱头中西红花苷-1的含量,同时探讨了植物组织培养技术应用于西红花球茎快速繁殖的可行性,主要研究结果如下:1.从不同产地引进药用西红花和观赏西红花的种球作为试验材料,就其形态特征、生长发育及园林应用等进行了调查与分析,比较系统地研究了药用西红花和观赏西红花的生物学特性及其观赏特性,探明了西红花叶、花生长发育的基本特征。2.应用RAPD技术,在DNA水平上分析了西红花种质资源的遗传多样性及亲缘关系,在8个供试品种之间检测到了丰富的RAPD多态性,聚类分析结果可以对药用西红花与观赏西红花进行鉴定。3.优化了西红花苷-1的HPLC技术,流动相以1%醋酸水溶液和甲醇为宜,可以准确定量西红花苷-1。从不同产地、贮存年限、烘制温度、采摘时期、取材部位等方面,探讨了影响西红花柱头中活性成分西红花苷-1含量的主要因素,结果表明,与其它因素相比,烘制温度对西红花苷-1含量的影响较为显著,105℃杀青30min处理,可以提高柱头西红花苷-1的含量。根据HPLC图谱分析,进一步确定了观赏西红花柱头中组成成分的种类。4.利用植物组织培养技术,探讨了西红花离体快繁的可行性。在灭菌处理、外植体类型、培养基组成及激素条件等方面,筛选了适宜药用西红花组织培养的技术条件,在诱导西红花球茎愈伤组织的过程中,以MS+6-BA5.0mg·L-1+NAA5.0mg·L-1+2,4-D0.5mg·L-1作为生长培养基,在短期内可得到大量的愈伤组织;在西红花球茎诱导无菌芽萌发、增值培养过程中,以MS+6-BA5.0mg·L-1+NAA5.0mg·L-1为宜。生根培养基以MS+NAA2.0mg·L-1为宜,诱导形成的不定根较粗壮,这为西红花组织培养快繁技术奠定了实验基础。
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