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研究背景：甲嘎松汤(又名“三味干姜散”)是一味藏药成方,其组成药物为干姜、豆蔻、肉豆蔻,被收载于《卫生部药品标准·藏药》中,主要用于小儿肝炎,寒性肝炎,肝肿大等,藏医将其广泛应用于肝脏疾病的治疗,常出现在治疗肝病的藏医药复方中。但其质量控制及其保肝机理尚不清楚,故本论文对此进行研究。目的：本课题对藏方甲嘎松汤进行含量测定及指纹图谱的研究,为后期动物实验提供物质基础；并研究甲嘎松汤于不同时间对慢性肝损伤大鼠模型中转录因子Nrf2、Bachl的影响,以阐明其保肝作用的机制,为该方的临床应用提供科学依据,为藏医药的研究和发展提供实验数据。方法：1.以6-姜辣素和去氢二异丁香酚为标准品,对不同时间购买的预用于动物实验的药材进行含量测定,以《中国药典》2010版为标准,考察所购买的药材是否合格。2.对不同时间购买的预用于动物实验的药材,进行指纹图谱研究,考察不同时间所购买的药材所含的化学成分是否相同。3.40%CCl4诱导大鼠慢性肝损伤实验SD大鼠随机分组,除正常组外皮下注射40%CCl4花生油混合溶液(即CCl4：花生油=2：3),复制慢性肝损伤模型。模型造模成功后给药,在给药的第2、4、6周末分别随机处理一批动物,腹主动脉取血,分离血清用于检测生化指标谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST)；将肝脏、脾脏、胸腺完整切离,称重计算脏器指数；利用HE染色法观察肝组织病理学变化；制备肝匀浆用于抗氧化酶GSH-Px的活性及MDA的含量：利用RT-PCR技术检测细胞内Nrf2、Bachl及HO-1的]mnRNA表达；利用Western blot技术检测Nrf2、Bachl胞核及胞浆的蛋白表达以及HO-1总蛋白的表达情况,并对上述指标进行相关性分析。结果：1.6-姜辣素：Y=84.252X-0.0847(r=0.9999,n=6),在48～480μg·mL-1浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系；去氢二异丁香酚：Y=533.99X+0.1364(r=0.9999,n=6),在12～120μg·mL-1浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系；该方法的精密度良好,重现性良好,供试品溶液在24h内稳定性良好,加样回收率良好。样品中6-姜辣素的含量为0.76%,去氢二异丁香酚的含量均为0.27%。符合《中国药典》2010版规定,所选用药材合格,各批次之间差异不大。2.该方法的精密度良好,重现性良好,供试品溶液在36h内稳定性良好。样品共获得15个共有峰,指认其中2个共有峰,测得各共有色谱峰的相对保留时间和相对峰面积比值的RSD分别在0.04%-0.98%和1.04%-2.76%,非共有峰的峰面积占总峰面积的百分比<10%,符合指纹图谱技术要求。所测色谱指纹图谱的相似度均大于0.9,表明10批药材之间具有较好的相关性,所含的化学成分基本一致。3.甲嘎松汤在治疗肝损伤的过程中,能够持续降低血清ALT、AST水平明显降低(P<0.05或P<0.01)；逐渐改善病理结构(P<0.05或P<0.01)；持续降低肝匀浆中MDA水平(P<0.01)；逐渐增强肝匀浆中GSH-Px的活力(P<0.01)；增加HO-1mRNA及蛋白的表达(P<0.01)；能够升高Nrf2的mRNA、核蛋白的表达及Nrf2核转位率(P<0.05),随着肝损伤的修复,肝组织中Nrf2mRNA表达及Nrf2核转位率下降(P<0.05或P<0.01)；降低Bachl的mRNA及蛋白的表达、升高Nrf2核/Bachl核水平(P<0.01),随着肝损伤的修复,Bachl的mRNA及蛋白的表达升高、Bachl浆蛋白及Nrf2核/Bachl核水平下降(P<0.01)甲嘎松汤组中细胞内HO-1蛋白表达量的变化,与胞核内Nrf2蛋白表达呈正相关性(r=1.000,P<0.01)、与Nrf2总蛋白表达呈正相关性(r=0.999,P<0.05)、与HO-1的mRNA表达呈正相关(r=0.998,P<0.05)；而与Bachl核内蛋白量呈相反趋势(r=-0.537,P>0.05)、与Bachl总蛋白量呈相反趋势(r=-0.466,P>0.05)、与Nrf2mRNA表达无相关性、与Nrf2转位率呈相同趋势(r=0.876,P>0.05)、与Nrf2/Bachl核蛋白呈相同趋势(r=0.668,P>0.05)。GSH-Px活力的变化与上述指标均表现出和HO-1蛋白相同的趋势,但无相关性(P>0.05)。结论：1.预用于动物实验的药材中6-姜辣素及去氢二异丁香酚的含量符合《中国药典》2010版的规定,说明所选用药材合格,且各批次之间差异不大。2.预用于动物实验的药材的指纹图谱相似度均大于0.9,表明所选用药材之间具有较好的相关性,所含的化学成分基本一致。3.甲嘎松汤在治疗肝损伤早期,能显著促进Nrf2入核,升高Nrf2核转位率,增加其核内蛋白表达量,同时显著促进Bachl的移出核,Nrf2核/Bachl核水平明显升高,从而允许Nrf2与ARE结合,促进抗氧化基因HO-1的表达,增强GSH-Px活力,降低MDA含量,进而发挥保肝作用。在抗氧化治疗后期,甲嘎松汤能促进Bachl入核,Nrf2核/Bachl核水平降低,和Nrf2竞争ARE,同时促使Nrf2的核移出,降低Nrf2核转位率,导致ARE介导的抗氧化基因HO-1表达下调, GSH-Px活力增加,MDA含量下降,肉眼观察及HE病理结果均显示肝脏基本修复至正常水平。综上所述,甲嘎松汤可根据病程对Nrf2与Bachl的调控,调节抗氧化系统的活性,达到抗氧化保肝的作用,为机体的恢复营造最佳条件。