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目的:对发酵虫草菌粉制剂金水宝治疗糖尿病肾脏疾病Ⅲ、Ⅳ期的临床疗效进行Meta分析;采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素建立DKD大鼠模型,比较不同工艺发酵虫草菌粉对DKD大鼠的作用,筛选效果最优的工艺,并进一步研究发酵虫草菌粉对DKD大鼠的作用机制。方法:1.计算机搜索The Cochrane Library、Pub Med、Web of Science、CNKI、VIP、Wan Fang Data,搜集金水宝治疗DKD的临床随机对照实验,时间均从建库至2019年3月1日。按照Cochrane系统评价方法筛选文献、提取资料并评价质量后采用Rev Man 5.2软件进行Meta分析。2.采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素建立DKD大鼠模型,给予六种不同工艺发酵虫草菌粉高、低剂量,使用血糖仪检测DKD大鼠FPG水平,试剂盒法检测DKD大鼠血清BUN、Scr、SOD、MDA、ALT、AST、hs-CRP,尿液Ucr、ALB、尿蛋白含量,HE染色检测DKD大鼠病理组织形态学改变。3.采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素建立DKD大鼠模型,给予筛选出来的发酵虫草菌粉B低、中、高剂量,试剂盒法检测DKD大鼠血清BUN、Scr、TC、TG、LDL-C、HDL-C、SOD、MDA、ALT、AST、IL-6、IL-8、TNF-α、hs-CRP、GSP、MPC-1、TGF-β1,尿液Ucr、ALB、尿蛋白含量,HE染色检测DKD大鼠病理组织形态学改变。4.采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素建立DKD大鼠模型,给予筛选出的发酵虫草菌粉B,提取肾组织蛋白,采用Nano-LC-LTQ-Orbitrap技术分析蛋白样品,使用Protein Discovery软件进行蛋白质鉴定,SIEVE软件进行相对定量定性分析,用Uniprot数据库(https://www.uniprot.org/)查找蛋白相关信息。结果:1.共纳入11个RCT,包括782例患者。Meta分析结果显示,金水宝可改善患者的肾功能,降低尿素氮[SMD=-1.15,95%CI(-1.94,-0.36),P=0.004]和血肌酐[SMD=-0.64,95%CI(-1.12,-0.02),P=0.04]水平,改善甘油三脂[SMD=-2.26,95%CI(-3.54,-0.98),P=0.0005]和总胆固醇[SMD=-1.16,95%CI(-2.03,-0.28),P=0.009]水平,降低尿微量白蛋白[SMD=-2.53,95%CI(-4.43,-0.64),P=0.009]的水平。亚组分析显示,在降低尿素氮水平上,金水宝对Ⅳ期患者的作用[SMD=-1.63,95%CI(-2.99,-0.28),P=0.02]优于对Ⅲ期患者的作用[SMD=-0.86,95%CI(-1.89,0.16),P=0.10];在改善血肌酐水平上金水宝对Ⅳ期患者的作用[SMD=-1.21,95%CI(-2.06,-0.36),P=0.005]优于对Ⅲ期患者的作用[SMD=-0.35,95%CI(-1.12,0.43),P=0.38]。2.DKD模型组大鼠FPG、肾重水平显著升高(P<0.01),体重明显降低(P<0.01),血清BUN、ALT、hs-CRP水平显著升高(P<0.01),尿液Ucr水平下调(P<0.01),ALB、尿蛋白水平显著升高(P<0.01)。发酵虫草菌粉低剂量组中,6种菌粉均能降低升高体重、Ucr、Ccr水平(P<0.01,P<0.05),降低FPG、BUN、Scr、尿蛋白水平(P<0.01,P<0.05);菌粉A、B、F能降低肾重水平(P<0.01,P<0.05),菌粉A、B、D、E、F能降低肾重/体重水平(P<0.01,P<0.05),菌粉A、B、C、D、F能降低ALT水平(P<0.01,P<0.05),菌粉A、B、C、E能升高SOD水平(P<0.01,P<0.05),菌粉C、E、F能降低ALB水平(P<0.01,P<0.05),菌粉F能降低hs-CRP水平(P<0.05)。在发酵虫草菌粉高剂量组中,6种菌粉均能降低hs-CRP水平(P<0.01,P<0.05),菌粉A、B、F能降低肾重水平(P<0.01,P<0.05),菌粉B能降低FPG、肾重/体重水平(P<0.01),菌粉B、C、D、F能降低BUN水平(P<0.01,P<0.05),菌粉A、D能降低Scr水平(P<0.01,P<0.05),菌粉D能升高Ucr水平(P<0.05),菌粉A、B、C、D、F能降低尿蛋白水平(P<0.01,P<0.05),菌粉A、F能降低ALT水平(P<0.01,P<0.05),菌粉B、C、D能降低MDA水平(P<0.01,P<0.05)。在肾脏组织结构上,DKD模型组大鼠部分肾小球肥大,肾小囊囊腔增大,肾小管上皮细胞空泡变性,部分肾小管管腔出现扩张,伴随着上皮细胞脱落,肾间质成分增多,可见部分炎性细胞浸润,发酵虫草菌粉组能在不同程度上改善上述情况,说明发酵虫草菌粉能改善肾功能相关指标,保护肾脏组织结构不被破坏从而达到保护肾脏的目的。3.DKD模型组大鼠FPG、肾重水平显著升高(P<0.01),体重明显降低(P<0.01),血清BUN、Scr、TC、TG、LDL-C、ALT、AST、IL-6、IL-8、TNF-α、hs-CRP、GSP、MCP-1、TGF-β1水平显著升高(P<0.01,P<0.05),SOD水平降低(P<0.05),尿液Ucr、ALB水平降低(P<0.01),尿蛋白水平显著升高(P<0.01)。与模型组相比,发酵虫草菌粉B各剂量组可在不同程度上降低肾重、肾重/体重、FPG、BUN、Scr、尿蛋白、ALB、TC、LDL-C、MDA、IL-6、IL-8、TNF-α、hs-CRP、FFA、GSP、MCP-1、TGF-β1,升高体重、Ucr、Ccr、HDL-C、SOD水平(P<0.05,P<0.01),且发酵虫草菌粉B高剂量组作用更加明显,并且能在不同程度上改善肾组织形态损伤。4.蛋白质组学分析结果显示,发酵虫草菌粉组与模型组相比,差异蛋白主要涉及糖代谢、能量代谢、物质转运、免疫炎症等相关蛋白。结论:1.发酵虫草菌粉制剂金水宝可改善糖尿病肾脏疾病Ⅲ、Ⅳ患者部分肾功能指标,更适合用于改善Ⅳ期患者尿素氮和血肌酐指标和降低Ⅲ期患者总胆固醇和甘油三酯水平,由于纳入研究的数量和质量所限,仍需要在临床研究上加以验证。2.六种不同工艺发酵虫草菌粉对DKD大鼠的肾保护作用明显,能不同程度改善肾功能指标及肾组织微观结构,其中发酵虫草菌粉B的作用较好。3.发酵虫草菌粉B对DKD大鼠具有一定的肾脏保护作用,与其具有降低血糖、调节血脂、改善氧化应激及炎症水平、抑制肾脏纤维化程度有关。4.TKT、FBPase、IDHs、14-3-3ε、α-2u球蛋白、MUPs、肌球蛋白VI等蛋白是发酵虫草菌粉防治DKD的潜在作用靶点。