【摘 要】
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本实验室利用两种预测模型在全基因组范围内进行候选印记基因筛选,得到若干候选基因,本课题所研究的基因 Arfip2就是其中之一。该基因的以往研究多集中于其蛋白的功能,对该基因
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本实验室利用两种预测模型在全基因组范围内进行候选印记基因筛选,得到若干候选基因,本课题所研究的基因 Arfip2就是其中之一。该基因的以往研究多集中于其蛋白的功能,对该基因表达模式的研究还未见报道。本课题对Arfip2蛋白进行了生物信息学分析后,重点分析了该基因在小鼠胚胎发育中后期的表达模式,并对该基因的印记状态和调控机制进行了初步研究,为进一步研究该基因的表达模式奠定了基础。 生物信息学分析表明,该基因位于小鼠7号染色体上,基因全长6.2kb,其编码蛋白为 ADP核糖基化因子结合蛋白2,属于Arfaptin家族。该基因是一个进化保守的基因,其蛋白功能域结构和BAR结构域十分类似。本课题利用基于 SNP的直接测序法分析了Arfip2基因的印记状态,结果显示在小鼠E15.5天胚胎的主要组织(脑、舌、心脏、肺脏、肝脏、肾脏、胎盘)中,该基因呈现出双等位表达的模式。之后,我们利用原位杂交和实时定量 PCR技术详细研究了在小鼠胚胎发育中后期Arfip2基因的表达模式。结果显示,该基因在 E9.5~E11.5天的胚胎中特异地只在脑中表达,其表达主要分布在端脑、中脑、菱脑。在 E12.5天的胚胎中,Arfip2基因表现出广泛表达的模式。在E12.5天的脑、舌、肝脏中检测到该基因强烈的表达信号,在心脏、肺脏、肾脏中的信号则相对较弱。在 E15.5天的胚胎中,Arfip2的表达广泛分布在脑、舌、肺脏、肝脏、肾脏和胸腺等组织中,而在心脏中的表达依然很低。定量PCR结果显示,在小鼠胚胎发育后期 Arfip2基因在脑、舌、肺、肝中有较高表达,从E12.5天到 E18.5天,该基因在心脏中的表达逐渐降低,在肾脏中的表达逐渐升高。在其他组织中,该基因的表达总体呈现一个下降的趋势。最后,我们对该基因启动子区的CpG岛进行了甲基化分析,亚硫酸盐测序分析显示,在E15.5天胚胎中该基因的启动子区是非甲基化,这意味着该基因在 E15.5天小鼠胚胎中的表达不受DNA甲基化调控。
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