目的:(1)以年龄、病程无差异的Wilson病(WD)肝纤维化患者作为研究对象,选用丹参颗粒作为对照治疗方法,观察肝豆扶木汤(GDFMT)对WD肝纤维化患者UWDRS肝脏功能评分、中医证候积分值、TGF-β1、TNF-α、IL-6值的影响,评价GDFMT治疗WD肝纤维化患者的临床疗效及对相关生化指标的影响。(2)以TGF-β1/smad信号转导通路为基础,以TX小鼠作为实验观察对象,应用可多靶点治疗WD肝纤维化的肝豆扶木汤(GDFMT)为干预药物,经过高、中、低浓度GDFMT不同疗程干预后,采用半定量RT-PCR检测肝组织中TGF-β1、TβRI、TβRII、Smad2、Smad3、Smad4和Smad7,探讨GDFMT抗WD肝纤维化的疗效及其通路机制。方法:临床部分:将符合WD肝纤维化纳入标准的60例患者随机分为治疗组(GDFMT组)30例,对照组(丹参组)30例。治疗组治疗药物予以GDFMT,对照组治疗药物予以丹参颗粒,同时予以2组患者相同的驱铜补钙基础治疗,基础治疗以8天作为一个疗程,予以DMPS静脉驱铜治疗6天,后2天予以补钙治疗,总计4个疗程。评价两组患者治疗前后UWDRS肝脏功能积分值、中医证候积分值;并检测两组患者TGF-β1、TNF-α、IL-6指标变化。实验部分:192只雄性TX小鼠被随机分为以下6组:GDFMT高剂量组、GDFMT中剂量组、GDFMT低剂量组(分别简称“高剂量组、中剂量组、低剂量组”)、模型组(生理盐水)、青霉胺组(青霉胺)、丹参组(丹参);另外以DL小鼠32只为正常对照组,共7组。予以7组受试动物相应的药物处理,每天灌胃1次,连续56天,分别于灌胃治疗后2、4、6、8周结束时将受试动物分批处死,每组每次8只。采用半定量RT-PCR检测各周各批TX小鼠肝组织内TGF-β1、TβRI、TβRII、Smad2、Smad3、Smad4和Smad7的m RNA相对表达量,并作出比较。结果:(1)临床部分:临床总疗效:治疗4个疗程后,可见治疗组临床总疗效明显优于对照组(P<0.01);治疗前两组患者中医证候积分值比较无差异(P>0.05);两组患者在治疗前UWDRS肝脏功能评分值无差异(P>0.05);两组分别与同组治疗前相比,治疗后中医证候积分值均降低(P<0.01,P<0.05);与同组治疗前相比,2组治疗后UWDRS肝脏功能评分值均降低,具有统计学意义(P<0.01,P<0.05);2组患者治疗后中医证候积分值对比,治疗组较对照组降低更明显(P<0.01);2组患者治疗后UWDRS肝脏功能评分值对比,治疗组治疗效果优于对照组(P<0.01)。临床疗效性指标评估:血清TGF-β1、TNF-α、IL-6治疗前两组间比较,治疗组和对照组治疗前TGF-β1、TNF-α、IL-6值均无差异(P>0.05);两组疗前、疗后组内比较,治疗组疗后较疗前TGF-β1、TNF-α、IL-6均显著降低(P<0.01),对照组治疗后TGF-β1、TNF-α、IL-6较治疗前有明显下降(P<0.01,P<0.05);治疗组、对照组治疗后比较,治疗组比对照组改善更加明显(P<0.01)。综上比较说明肝豆扶木汤具有良好的抗肝纤维化临床疗效。(2)实验部分:各组受试动物经治疗2、4、6、8周后的检验指标比较结果如下:⑴模型组2、4、6、8周与对应的正常组比较,TGF-β1、TβRI、TβRII、Smad2、Smad3和Smad4的m RNA相对值显著升高,Smad7m RNA相对值显著降低(P<0.01)。⑵各治疗组与对应模型组比较如下:(1)高剂量组、中剂量组、丹参组、青霉胺组2、4、6、8周及低剂量组4、6、8周较对应模型组,TGF-β1、TβRI、TβRII、Smad2、Smad3和Smad4的m RNA相对值均下降,Smad7m RNA相对值上升(P<0.05,P<0.01);(2)低剂量组2周较对应模型组无统计学差异(P>0.05);⑶GDFMT高剂量组与对应GDFMT中、低剂量组、丹参组、青霉胺组比较如下:(1)GDFMT中、低剂量组、丹参组、青霉胺组2、4、6、8周及青霉胺4、6、8周与对应的GDFMT高剂量组比较,TGF-β1、TβRI、TβRII、Smad2、Smad3和Smad4的m RNA相对表达量降低,Smad7m RNA的相对表达量升高(P<0.05,P<0.01);(2)与青霉胺组2周比较,GDFMT高剂量组与其无统计学差异(P>0.05)。⑷GDFMT中剂量组与丹参组、青霉胺组、低剂量组比较如下:(1)中剂量组与丹参组比较无统计学差异(P>0.05);(2)与青霉胺组比较,中剂量组2、4周的TGF-β1、TβRI、TβRII、Smad2、Smad3和Smad4的m RNA相对表达量较其高,Smad7m RNA的相对表达量较其低(P<0.05,P<0.01);青霉胺组与中剂量组6、8周比较,TGF-β1、TβRI、TβRII、Smad2、Smad3和Smad4的m RNA相对表达量降低,Smad7m RNA的相对表达量升高(P<0.05,P<0.01);(3)低剂量与对应中剂量组6、8周比较,TGF-β1、TβRI、TβRII、Smad2、Smad3和Smad4的m RNA相对表达量较其低,Smad7m RNA的相对表达量较其高(P<0.01);低剂量组2周与对应中剂量比较无差异(P>0.05)。⑸丹参组与青霉胺组、低剂量组比较如下:(1)丹参组2、4周较对应青霉胺组TGF-β1、TβRI、TβRII、Smad2、Smad3和Smad4的m RNA相对表达量较其高,Smad7m RNA的相对表达量较其低(P<0.05,P<0.01);丹参组6、8周较对应青霉胺组TGF-β1、TβRI、TβRII、Smad2、Smad3和Smad4的m RNA相对表达量降低,Smad7m RNA的相对表达量升高(P<0.05,P<0.01);(2)丹参组6、8周与对应低剂量组比较,TGF-β1、TβRI、TβRII、Smad2、Smad3和Smad4的m RNA相对表达量较其低,Smad7m RNA的相对表达量较其高(P<0.01);丹参组2周与对应低剂量组比较无差异(P>0.05)。⑹青霉胺组与低剂量组比较如下:青霉胺2、4周较对应低剂量组,TGF-β1、TβRI、TβRII、Smad2、Smad3和Smad4的m RNA相对表达量较其低,Smad7m RNA的相对表达量较其高(P<0.05,P<0.01);青霉胺组6周较对应低剂量组无差异(P>0.05);青霉胺8周较对应低剂量组,TGF-β1、TβRI、TβRII、Smad2、Smad3和Smad4的m RNA相对表达量较高,Smad7m RNA的相对表达量较低(P<0.01)。⑺(1)GDFMT高剂量组4周与对应2周相比,TGF-β1、TβRI、TβRII、Smad2、Smad3和Smad4m RNA相对值降低,Smad7m RNA相对值升高(P<0.01);(2)GDFMT中、低剂量组4周与对应2周相比,无明显差异(P>0.05)。⑻6周与对应4周比较,TGF-β1、TβRI、TβRII、Smad2、Smad3和Smad4m RNA相对值降低,Smad7m RNA相对值升高(P<0.01);⑼8周与对应6周比较,TGF-β1、TβRI、TβRII、Smad2、Smad3和Smadm RNA相对表达量均降低,Smad7m RNA相对表达量则升高(P<0.01)。结论:(1)GDFMT能够有效地改善WD肝纤维化患者中医证候积分及UWDRS肝脏功能评分,改善其临床症状和体征。(2)GDFMT能够有效地降低WD肝纤维化患者TGF-β1、TNF-α、IL-6,发挥抗纤维化的作用。(3)GDFMT使TGF-β1、TβRⅠ、TβRⅡ、Smad2、Smad3、Smad4的m RNA相对表达量下降、Smad7m RNA相对表达量升高,说明GDFMT能够调控TGF-β1/Smad信号转导通路中的蛋白表达,抑制TGF-β1/Smad信号传导通路激活HSC,从而发挥抗纤维化作用,且对TGF-β1/Smad信号传导的调控呈量效-时效依赖性。