卷枝毛霉Mucor circinelloides作为一种产油脂丝状真菌,可用于多种不饱和脂肪酸的生产,具有重大的经济价值。为进一步探究卷枝毛霉的代谢途径和分子机理,本课题对Mucor circinelloides EIM-10的Δ12-脱饱和酶和Δ9-脱饱和酶基因进行克隆分析和表达。结果显示,Δ12-脱饱和酶和Δ9-脱饱和酶全长分别为1191bp和1359bp,编码397和453个氨基酸。序列比对显示,与Amylomyces rouxii (GenBank: AY995173.1)和Mucor circinelloides (GenBank:AF533361.1)具有94%的相似性。将Δ12-脂肪酸脱饱和酶基因连接到酵母表达载体pYES2.0,构建重组表达载体pYMCD12,转入酿酒酵母表达,培养过程中添加半乳糖诱导表达。提取总脂肪酸,GC-MS检测分析：在Δ12-脱饱和酶的催化下,pYMD12将内源油酸(C18:1)转化成亚油酸(C18:2),转化效率36.401%。为了提高表达量,本实验继续探究启动子MD6p和GAP对Δ12-脱饱和酶表达效率的影响。从毕赤酵母表达载体pGAPZa中克隆到GAP启动子,将GAP连接到pYMD12载体中,成功构建pYGAPMD12表达载体；用Δ12-脱饱和酶cDNA替换pYMD6pMD6表达载体中的Δ6-脱饱和酶基因,成功构建pYMD6pMD12表达载体。运用醋酸锂转化法将表达载体转化进酿酒酵母营养缺陷型菌株INVScl中,无需半乳糖诱导表达。提取总脂肪酸,GC-MS检测分析：相对pYMD12,pYMD6pMD12转化C18:1的转化率提高了18.432%,而pYGAPMD12转化C18:1的转化率提高了32.771%;另外pYMD6pMD12不将C16:1转化成C16:2,而pYGAPMD12可以转化C16：1,转化效率为32.943%。