氟喹诺酮（Fluoroquinolones,FQs）是一类以4-喹诺酮为基本结构的人工合成抗菌药,主要应用于畜禽动物细菌感染性疾病的防治。FQs主要通过与DNA旋转酶或拓扑异构酶结合而阻碍细菌DNA的合成,从而对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌产生抗菌作用。但是近年来,人类对FQs的不合理使用问题日益突出,伴随而来的环境污染、耐药性和药物残留等问题严重威胁人类健康。因此,我国对动物源性食品中FQs残留超标的整治力度加大,相应的检测要求也在不断提高。而且,养殖户在养殖过程中针对不同目的可能添加不同的FQs,导致畜禽中可能出现多种FQs残留,所以针对单一FQs的检测手段也很有可能造成假阴性。为了避免假阴性,对免疫分析的灵敏度和广谱性有着更高要求,而高质量的单克隆抗体（Monoclonal antibody,m Ab）则是提高检测方法灵敏度和广谱性的关键因素。马波沙星（Marboflaxacin,MBF）是FQs药物的一种,其半抗原的分子构象与大多数FQs药物相近,用它合成免疫原进行免疫,有利于获得广谱性抗体。在第二章中,通过碳化二亚胺法合成了MBF的免疫原和包被原,用MBF的免疫原免疫小鼠,总共免疫5次。在第五次免疫后,根据间接竞争酶联免疫吸附法（Indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA）检测小鼠血清的结果,选择抑制好、检测效价高的阳性小鼠的脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。融合后的杂交瘤细胞经三次亚克隆和筛选,共获得了4株细胞株。然后采用体内诱生腹水瘤法来制备腹水,再通过正辛酸-饱和硫酸铵法纯化腹水,共获得4种高质量的抗多种FQs的m Abs,分别命名为M4E3、M7A6、M3C7和M5C6。这些抗体的灵敏度和特异性分别通过ic-ELISA进行了评价。结果显示M4E3、M7A6、M3C7和M5C6抗体针对MBF的IC50分别为0.07 ng m L-1、1.03ng m L-1、0.77 ng m L-1和0.88 ng m L-1,线性范围分别为0.01-0.47 ng m L-1、0.02-47.18 ng m L-1、0.30-2.00 ng m L-1和0.08-10.23 ng m L-1。其中,M4E3抗体与洛美沙星、氧氟沙星、恩诺沙星、氟罗沙星、达氟沙星、培氟沙星和二氟沙星等7种FQs的交叉反应率均高于21.21%,这表明M4E3抗体除了可以检测MBF,还可以检测这7种FQs。在第三章中,将筛选得到的M4E3抗体与胶体金偶联后喷到结合垫上,将样本垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装成胶体金免疫层析试纸条。对该试纸条中的实验参数进行了优化,结果表明M4E3抗体与胶体金偶联的最佳p H是6.0,抗体的最佳标记量是10μg m L-1,T线全抗原的最佳浓度是0.6 mg m L-1,检测时间为10 min。同时,还比较了5种样品前处理方法,最终选取含5%Tween 20的Mellvaine缓冲液提取猪肉和鸭肉中的FQs,并将样品加热煮沸5 min以去除肉中的蛋白质等杂质干扰。最后,将该前处理方法与胶体金免疫层析试纸条有效结合,可以快速定性检测MBF、氧氟沙星、洛美沙星、培氟沙星、达氟沙星、恩诺沙星、二氟沙星和氟罗沙星等8种FQs;它们在猪肉中的裸眼检测线分别为2μg kg-1、2μg kg-1、0.5μg kg-1、2μg kg-1、2μg kg-1、5μg kg-1、5μg kg-1和5μg kg-1,在鸭肉中的裸眼检测线分别为1μg kg-1、1μg kg-1、0.5μg kg-1、5μg kg-1、2μg kg-1、5μg kg-1、5μg kg-1和2μg kg-1。综上所述,本研究制备的抗FQs单克隆抗体M4E3与MBF、洛美沙星、氧氟沙星、恩诺沙星、氟罗沙星、达氟沙星、培氟沙星和二氟沙星等8种FQs有较高的交叉反应率,基于此抗体所建立的胶体金免疫层析法可以在现场快速灵敏地检测猪肉和鸭肉中的这8种FQs。