论文部分内容阅读
哲罗鲑在分类学上隶属于硬骨鱼纲(Osteichthyes)、辐鳍亚纲(Actinopterygii)、鲱形总目(Clupeomorpha)、鲑形目(Salmoniformes)、鲑亚目(Salmonoidei)、鲑科(Salmonidae)、鲑亚科(Salmoninae)、鲑属(Salmo)。具有个体大、生长速度快、肉质细嫩鲜美、营养价值丰富等特点。目前我国内陆冷水水域分布有2亚种,有溯河型及纯淡水栖息种群之别。鱼类是最早出现免疫球蛋白的生物。免疫球蛋白基因序列在鱼类进化分界处表现出了很大的变化,并且鲑科鱼类起源于特殊的地理时期,因此对鲑科鱼类的免疫球蛋白基因序列进行研究,对古生物地理学、古生态学、气候变化及脊椎动物进化系统等许多方面均具有重要意义。就此,本文采用分子生物学和生物信息学相结合的方法,对哲罗(Hucho taimen)的免疫球蛋白重链可变区及恒定区序列进行研究和功能分析,并与虹鳟(Oncorhynchus myki.ss)序列(Genbank登录号为S63348.1)进行相似性比较。从哲罗鲑主要免疫器官—脾脏获得总RNA并采用RT-PCR技术获得其免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)重链cDNA克隆,获得32条完整不重复可变区序列以及1条恒定区序列,经过BLUST网络对比,结果显示与GenBank报道的登录号为S63348.1的虹鳟序列的相似性高达87.4%以上；对所得核苷酸序列进行结构域可变性分析可见,哲罗鲑Ig重链可变区VH中骨架区(framework region,FR)部分相对保守,变异率较低；互补决定区(Complementarity determining region,CDRs)变异率较大,特别是CDR3区变异可达35。免疫球蛋白重链可变区VH中D和J片段的的随机重排,外切酶的作用,以及在重排位点大量N,P片段的插入都大大增加了哲罗鲑免疫球蛋白重链可变区的多样性。恒定区序列与斑点叉尾鲴(Ictalurus punctatus)、草鱼(Ctenopharyngodon idella)、虹鳟(Oncorhynchus mykiss)和大西洋鲑(Salmo salar)的免疫球蛋白进行比较后显示哲罗鲑和虹鳟及大西洋鲑的IgM亲缘关系比较近,据此推断本文获得哲罗鲑免疫球蛋白类型为IgM。