羊膜提取液对兔准分子激光术后haze的影响机制

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目的探讨羊膜提取液(amniotic extraction, AE)对准分子激光屈光性角膜切削术(photorefractive keratectomy, PRK)后伤口愈合过程的影响及减轻PRK术后角膜上皮下雾状混浊(haze)的作用机制。方法健康无眼疾的27只新西兰大白兔(54只眼),采用完全随机分组设计方案,随机分为三组(实验组、激素组与空白组),每组9只兔(18只眼)。制造PRK动物模型(PTK模式下去除兔角膜上皮,PRK治疗模式下按-10D、6.5mm切削直径进行角膜切削)。术后实验组滴用AE,激素组用0.1%磷酸地塞米松眼液,空白组用不含AE的赋形剂,术后每天观察眼部大体情况。于1、4、8W处死每组3只实验兔,取双眼角膜组织,采用光镜观察角膜切削区中央上皮的恢复情况,免疫荧光染色检测α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth musclea actin,α-SMA)、CD11b,原位末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)检测角膜基质细胞的凋亡,并进行统计学分析。结果1、术后1W,光学显微镜下见,三组的角膜上皮细胞均已完全覆盖激光切削面,上皮基底细胞大小不均,上皮细胞层间排列极不规则,基质浅层有较多角膜基质细胞积聚。术后4W,激素组和空白对照组基质浅层内较多新生胶原,排列不规则,失去板层结构,瘢痕形成。术后8W,三组角膜上皮仍未恢复至正常,角膜激素组和空白组基质浅层见大量新生胶原纤维,排列极不规则(图1-4)。2、术后1、4、8W CD11b在三组均未见明显阳性细胞表达。三组比较无统计学差异。3、术后1W TUNEL阳性细胞在三组均有表达,AE组较空白对照组、激素组的阳性细胞明显减少;术后4W TUNEL阳性细胞在空白对照组有表达,AE组、激素组未见明显的阳性细胞表达(p<0.01)。术后8W三组均未见明显凋亡阳性细胞的表达。4、术后1、4、8Wα-SMA在空白对照组、激素组的角膜基质浅层均有阳性表达,且术后4W阳性表达的细胞数目较1W增高;术后8W较4W的阳性细胞数目减少。术后1、4、8Wα-SMA在AE组的表达均为阴性(p<0.01)。结论AE可以减少PRK术后haze的产生。其机制可能为AE能够减少细胞凋亡,减少肌成纤维细胞的产生与聚集从而减少胶原与瘢痕形成。
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