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目的：皮肤衰老以及颜面部明显的小凹陷严重影响了外貌美。研究证实,这些问题都与真皮层结构改变,胶原蛋白减少有密切关系。理论上,成纤维细胞是种理想的填充剂,注射后能有效改善皱纹和微小凹陷。本实验主要探讨重组人PDGF-BB和重组人CTGF单独或联合应用对体外培养的人皮肤成纤维细胞(Human Skin Fibroblast,HSF)增殖的影响,为体外快速大量扩增成纤维细胞,缩短细胞培养周期和临床治疗周期提供多种参考方案,推动该技术早日付诸临床,造福群众。方法：1、人皮肤成纤维细胞的培养及纯化取手术中切除的正常包皮组织进行体外培养,获得原代HSF。采用多次差别消化法进行细胞纯化。2、MTT法检测rhPDGF-BB和rhCTGF对体外培养的HSF增殖的影响取生长状态良好的第4-7代成纤维细胞,以2×104/ml接种于96孔板中,100ul/孔。随机分为对照组和实验组,对照组不加生长因子,实验组分别加入不同浓度的rhPDGF-BB、rhCTGF或rhPDGF-BB+rhCTGF,分别于作用1、3、6、9d时,采用MTT法检测其对体外培养的HSF增殖的浓度时间效应。结果：1、人皮肤成纤维细胞在体外均为贴壁生长型细胞。最初呈圆形或类圆形,集落样生长。随着培养天数的增加,细胞数量增多,逐渐伸展呈梭形并散在分布,量多时呈栅栏状、漩涡状或放射状排列。传至第3-4代时,HSF纯度增加并呈优势生长,呈典型的成纤维细胞形态。2、在四个测试时间点,不同浓度的rhPDGF-BB实验组与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。各实验组两两比较,发现rhPDGF-BB100ng/ml组的促增殖作用明显高于其他浓度组(P<0.05),而rhPDGF-BBO.1ng/ml组的促增殖作用最弱(P<0.05)。该促增殖作用在1-9d,0.1～100ng/ml范围内呈浓度时间依赖性。3、在四个测试时间点,不同浓度的rhCTGF与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。各实验组两两比较,除第1天时50ng/ml浓度组的增殖效果优于100ng/ml组(P<0.05)外,在1-9d内10～100ng/ml组对成纤维细胞的增殖作用呈浓度时间依赖性,而rhCTGF150ng/ml组的增殖效果相对100ng/ml组略成下降趋势。4、两联合组与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。其促增殖效果亦表现为时间浓度依赖关系,并在一定程度上优于两者单独应用时,rhPDGF-BB0.1ng/ml组除外(P>0.05)。另外,rhPDGF-BB100ng/ml组与rhCTGF100ng/ml组相比,差异具有统计学意义,P<0.05；而rhPDGF-BB0.1ng/ml组与rhCTGF10ng/ml组相比,差异无统计学意义,P>0.05。结论：rhPDGF-BB和rhCTGF均可促进体外培养的人皮肤成纤维细胞增殖,在一定范围内呈浓度时间依赖关系,而且前者优于后者。两者联合应用对HSF增殖具有协同效应。