论文部分内容阅读
据WHO统计,沙门菌是世界范围内危害食品安全的主要病原微生物。沙门菌污染的鸡肉及其产品是人类沙门菌病的主要原因之一。我国是家禽及其相关产品生产和食用的大国,沙门菌防控更应受到重视。然而在鸡的饲养过程中,沙门菌常呈潜伏感染,易被忽视。规模化种鸡场种鸡养殖是家禽生产链的源头,也是沙门菌防控的重要环节,加强健康的种鸡源头沙门菌防控有益于促进家禽生产链的发展,以保证我国“从农场到餐桌”健康食品供应。本研究通过对国内三家规模化种鸡场的沙门菌流行病学进行调查,揭示规模化种鸡场沙门菌流行规律,寻找沙门菌在种禽场内流行的重要防控环节,并探索噬菌体作为新型生物消减措施的可行性。1规模化种鸡场沙门菌流行病学调查及其特性分析从三家规模化种鸡场收集780份血清样品进行沙门菌血清流行病学调查,三家种禽场其沙门菌血清感染阳性率分别为,A种鸡场5.30%,B种鸡场16.72%,C种鸡场为11.57%。在沙门菌病原流行病学调查中,从三家规模化种鸡场,采集样品2,033份,包括病死鸡样品15份,死胚样品930份,环境样品632份,收集送检菌株456份,共分离539株沙门菌,死胚的分离率为12.04%,病死鸡和环境样品分别为6.67%和1.71%,送检菌株中91.66%鉴定为沙门菌。三家种鸡场沙门菌分离率存在明显差异,除了送检菌株样品外,A种鸡场沙门菌分离率为1.49%,B种鸡场分离率为23.85%,C种鸡场分离率为17.2%。血清型鉴定结果显示肠炎沙门菌为三家种鸡场的主要血清型,占比达96.10%,其它沙门菌为3.90%。抗生素耐药性实验结果显示,在所测沙门菌分离株中,对萘啶酸耐药比例最高,达99.13%;其次对呋喃妥因、氨苄西林、链霉素、恩诺沙星、阿莫西林耐药率分别为72.60%、62.60%、62.17%、44.78%、36.08%。其余药物耐药率均在8.26%以下。毒力基因检测结果显示,122株分离株中120株毒力基因谱一致(98.36%),仅有2株(1.64%)例外。22株肠炎沙门菌分离株CRISPR测序结果显示,其CRISPR类型与P1251209肠炎沙门菌一致,同为SET]类。对22株肠炎沙门菌分离株进一步进行全基因组测序,其结果表明来自不同种鸡场的肠炎沙门菌分离株之间同源性达到99.8%,可能为同一克隆簇。对来源于同一种鸡场不同环节的57株沙门菌进行PFGE分型实验,结果表明该种鸡场的水源及环境为沙门菌在种禽场内流行的主要来源。2不同化学消毒剂和噬菌体新型生物消减措施评估化学消毒剂是生产中常见的防控措施,本实验选用五种类型七种不同的化学消毒剂开展沙门菌消减能力评估。通过检测化学消毒剂的最小抑菌浓度(MIC)与最小杀菌浓度(MBC)评估其对沙门菌的消减能力,结果表明,五种不同类型的化学消毒剂对肠炎沙门菌、鸡白痢沙门菌、印第安纳沙门菌、鼠伤寒沙门菌、阿贡那沙门菌均有一定抑菌效果,其MIC分别为癸甲溴铵10.42 μg/mL,过硫酸氢钾250μg/mL,二氯异氰尿酸钠500 μg/mL,聚维酮碘5,000μμg/mL,稀戊二醛312.5μg/mL,戊二醛癸甲溴铵31.25μg/mL,戊二醛苯扎溴铵62.5μg/mL。其MBC结果除稀戊二醛浓度由312.5μg/mL变为625 μg/mL外,其余结果与MIC结果一致。本研究使用噬菌体作为新型沙门菌特异性生物制剂进行消减能力评估,噬菌体LP31在25℃与37℃条件下,LP31可完全杀灭水中的沙门菌。喷洒噬菌体对地面环境内的沙门菌进行消减能力评估结果显示,与对照组相比,噬菌体LP31、SP55均显著减少地面环境内沙门菌,减少量分别达到0.951、0.643 logCFU/mL。口服噬菌体悬液对鸡体内沙门菌也具有显著的消减能力,与对照组相比,噬菌体LP31在鸡体内最高可降低3.021logCFU/mL。综上所述,我国种禽场的沙门菌感染比较严重,其中肠炎沙门菌为主要血清型,水源及环境是沙门菌传播的重要环节,噬菌体具有显著消减沙门菌的能力,能够作为新型生物消毒剂,减少沙门菌传播。