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目的研究不同浓度生长抑素类似物奥曲肽抑制结肠癌SW480细胞生长增殖作用以及诱导凋亡的作用;探讨奥曲肽对结肠癌细胞Wnt/β-catenin信号传导通路中GSK-3β、GSK-3β(Phospho-Ser9)及GSK-3β(Phospho-Tyr216)蛋白表达水平的影响,阐述奥曲肽抗肿瘤作用机制及靶点,以进一步研究分析生长抑素抗肿瘤作用机制,为寻找具有开发前景的Wnt/β-catenin信号传导通路候选药物提供实验和理论依据。方法1体外培养人结肠癌SW480细胞作为研究对象。2奥曲肽对人结肠癌SW480细胞生长增殖的抑制作用2.1 MTT比色法测定不同浓度奥曲肽抑制SW480细胞增殖作用,以效价强度最高者为最佳抑制浓度。2.2平皿集落形成法测定奥曲肽抑制体外培养SW480细胞的锚定依赖性生长作用。3奥曲肽诱导人结肠癌SW480细胞凋亡作用3.1 AO/EB染色荧光显微镜观察奥曲肽诱导SW480细胞凋亡的形态学改变。3.2 DNA凝胶电泳证实奥曲肽诱导SW480细胞凋亡作用。4奥曲肽对SW480细胞内GSK-3β磷酸化水平的调节作用4.1应用Western-blot法分析不同浓度奥曲肽对SW480细胞中GSK-3β蛋白表达的影响。4.2应用Western-blot法分析奥曲肽对SW480细胞中GSK-3β(Phospho-Tyr216)蛋白表达的影响。4.3应用Western-blot法分析奥曲肽对SW480细胞中GSK-3β(Phospho-Ser9)蛋白表达的影响。结果1奥曲肽对人结肠癌SW480细胞生长增殖的抑制结果1.1 MTT比色法测定结果显示:不同浓度奥曲肽对SW480细胞增殖活性具有不同程度的抑制作用,10-12M、10-10M、10-8M、10-6M(mol/L)奥曲肽处理SW480细胞后,对生长增殖的抑制率分别为2.36%、15.12%、34.80%、35.16%(P<0.05),其中10(-8M为最佳抑制浓度。1.2平皿集落形成法的结果显示:奥曲肽对SW480细胞锚定依赖性生长具有明显的抑制作用,10-10M、10-8M、10-6M奥曲肽处理SW480细胞后,集落抑制率分别为19.67%、34.43%、37.70%(P<0.05)。2奥曲肽诱导人结肠癌SW480细胞凋亡结果2.1 AO/EB染色荧光显微镜观察奥曲肽处理后,部分SW480细胞呈现典型凋亡细胞形态特征。10-10M,10-8M和10-6奥曲肽处理SW480细胞后,细胞凋亡指数分别为21.8%±6.4%,34.9%±9.6%,41.5%±10.8%(P<0.05)。2.2奥曲肽(10-8 M,10-7M,10-6 M)作用SW480细胞48小时后,琼脂糖凝胶电泳出现典型“梯形”DNA条带。3奥曲肽调节SW480细胞内GSK-3β磷酸化水平结果3.1奥曲肽能呈浓度依赖性上调SW480细胞中GSK-3β蛋白的表达。10(-10M,10-8M和10-6M奥曲肽作用24h后,非磷酸化GSK-3β蛋白表达分别上调了9.21±1.62%,24.93±3.49%,32.52±3.82%(P<0.05)。3.2奥曲肽能呈浓度依赖性上调SW480细胞中GSK-3β(Phospho-Tyr216)蛋白的表达。10(-10M,10-8M和10-6M奥曲肽作用24h后,GSK-3β(Phospho-Tyr216)蛋白表达分别上调了9.23±1.02%,21.36±3.34%,102.27±7.37%(P<0.05)。3.3奥曲肽能呈浓度依赖性下调SW480细胞中GSK-3β(Phospho-Ser9)蛋白的表达。10(-10M,10(-8M和10(-6M奥曲肽作用24h后,GSK-3β(Phospho-Ser9)蛋白表达分别下调了35.12±4.72%,58.63±6.43%,67.84±7.87%(P<0.05)。结论1.奥曲肽具有抑制体外培养人结肠癌SW480细胞生长增殖作用,并在一定范围内呈浓度依赖性。2.奥曲肽能有效诱导体外培养人结肠癌SW480细胞凋亡,并在一定范围内呈浓度依赖性。3.奥曲肽可上调结肠癌SW480细胞中GSK-3β和GSK-3β(Phospho-Tyr216)蛋白的表达,下调GSK-3β(Phospho-Ser9)蛋白的表达,提示奥曲肽可增强GSK-3β的活性,从而抑制Wnt信号通路。4.奥曲肽抑制SW480细胞生长增殖及诱导其凋亡可能与Wnt信号通路中GSK-3β活性增强有关。