多抗霉素B的制备和发酵液的提取工艺研究

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多抗霉素(polyoxin)属嘧啶核苷类农用抗生素,具有高效、低毒的特点,对多种植物真菌病害具有很好的防治效果,对天敌和植物安全,且不易产生抗药性。多抗霉素原药和制剂目前在我国已有多个厂家登记,但真正投入生产的厂家很少。就产业化现状而言,还存在几个关键的技术问题亟待解决。目前市场上无多抗霉素对照品提供,多抗霉素原药和制剂的检测依赖于生物效价法评价;多抗霉素原药未经过精制,最终产品有效成分含量较低。本论文针对质量检测和原药精制等制约多抗霉素产业化的关键技术进行了初步研究。多抗霉素属多组分抗生素,发酵液中类似的嘧啶核苷类化合物有二十多个,且都属于不易分离的水溶性化合物,分离纯化难度很大。多抗霉素B是发酵液中含量相对较大的组分,也是大多数企业产品质量标准中定量检测的有效成分。本论文采用离子交换层析、活性炭吸附、凝胶层析、中压离子对色谱和高压离子对色谱法建立了发酵液中多抗霉素B的克级水平的制备工艺,最终产品纯度达到97%以上,可满足多抗霉素原药和制剂质量检测的要求。以三氟乙酸为离子对试剂,建立了多抗霉素原药的高效液相色谱检测方法,具体色谱条件为:博迈Unisil C18柱(4.6×250 mm,粒径5μm),流动相:甲醇/0.1%三氟乙酸=2/98,流速:0.8 m L·min-1,柱温为35℃,检测波长为260 nm。通过比较多抗霉素在不同型号离子交换树脂上的吸附解吸行为,对多抗霉素的制备工艺进行了初步研究,最终确定筛选出001×7强酸性阳离子交换树脂为吸附材料。最佳吸附条件为:发酵液p H值为4.0,流速为2 BV/h,上样浓度为1 mg/m L。最优解吸条件为:解吸剂为0.4 mol/L氨水,流速为2 BV/h,洗脱体积为3 BV,解吸率可达85.6%。本研究结果对于提升多抗霉素的产业化水平具有较好的参考价值。
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