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甲霜灵是一种新型渔用药物,常用来替代孔雀石绿,以预防和治疗水霉菌等真菌引起的淡水鱼感染。我国农业部2017年发布的2505号公告制定了淡水鱼肌肉组织中甲霜灵的最大残留限量（试行）,但是至今尚未制定相应的检测方法标准。为规范淡水鱼养殖过程中甲霜灵的使用,保障消费者的健康,需建立淡水鱼中甲霜灵残留的检测方法,监控淡水鱼中甲霜灵残留量。本文以草鱼等5种淡水鱼为研究对象,通过对样品的前处理方法、色谱及质谱条件的优化,建立了淡水鱼中甲霜灵残留量的高效液相色谱法（HPLC）和液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）。本文研究内容和结果如下:1、淡水鱼中甲霜灵残留高效液相色谱（HPLC）检测方法的建立淡水鱼样品用0.1%磷酸溶液提取后,PAX固相萃取柱净化,采用荧光检测器检测,外标法定量。研究结果表明,甲霜灵在0.05～5.00μg/m L浓度范围内,线性关系良好,相关系数（R~2）为0.9999,检出限（LOD）为0.006 mg/kg,定量限（LOQ）为0.02mg/kg。在草鱼、罗非鱼、鲤鱼等空白样品中分别添加0.02 mg/kg、0.05 mg/kg、0.10mg/kg的甲霜灵标准溶液,加标回收率为79.7%～92.6%,相对标准偏差（RSD）为1.1%～8.0%。该方法前处理操作简单、杂质干扰少、灵敏度和回收率高。2、淡水鱼中甲霜灵残留液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）检测方法的建立淡水鱼样品经乙腈提取后,采用分散固相萃取剂乙二胺基-N-丙基（PSA）、C18净化,电喷雾正离子（ESI+）模式电离,多反应监测模式（MRM）检测,外标法定量。甲霜灵在0.5～20.0 ng/m L浓度范围内,线性关系良好,R~2为0.9990,LOD为0.0015 mg/kg,LOQ为0.005 mg/kg。在草鱼、罗非鱼、鲤鱼、鲢鱼、鲫鱼等空白样品中分别添加0.010mg/kg、0.025 mg/kg、0.050 mg/kg的甲霜灵标准溶液,加标回收率为82.5%～97.7%,RSD为1.7%～8.2%。本文建立的LC-MS/MS法测定淡水鱼中甲霜灵残留量,避免出现假阳性样品,定量限比HPLC法低了4倍,抗干扰能力更强,定量结果更加准确。3、淡水鱼中甲霜灵残留的实际样品检测本文运用建立的HPLC法和LC-MS/MS法对草鱼等12种淡水鱼中甲霜灵残留进行检测,共检测60份样品,其中2份样品检测出甲霜灵残留。HPLC法检测出鲤鱼、鲫鱼样品中甲霜灵残留量分别为0.0374 mg/kg、0.0423 mg/kg。LC-MS/MS法检测鲤鱼、鲫鱼样品中甲霜灵残留量分别为0.0370 mg/kg、0.0415 mg/kg。12种淡水鱼样品中甲霜灵检测结果均没有超过农业部2505号公告中规定的最大允许残留量0.05mg/kg。通过对实际样品的检测,表明本文建立的两种检测方法的测定结果在允许误差范围内。因此,本文建立的两种方法都适用于淡水鱼中甲霜灵残留量检测。