重庆枇杷灰斑病菌鉴定、抗性评价及防控研究

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枇杷灰斑病是目前枇杷生产中面临的最普遍、最广泛的病害之一。不仅大幅降低枇杷座果率也影响枇杷的内有及外在品质。本试验研究了重庆地区的枇杷灰斑病菌种类及侵染特性,利用分子标记技术研究其内在多样性;建立主要病原——枇杷拟盘多毛孢菌的室内致病力评价方法:并对94份枇杷种质的抗病水平进行评价;筛选有效的杀菌剂并进行田间防效试验,分析其杀菌机制,为枇杷灰斑病害的控制提供依据。1.运用形态学.rDNA-ITS和β-tubulin片段测序及比对等手段鉴定了重庆地区的拟盘多毛孢菌样品。从枇杷灰斑病典型病叶上共分离到6株拟盘多毛孢属真菌;致病性测定发现,6株菌株都会对枇杷叶片造成病斑:采用ITS、β-tubulin序列构建系统进化树分析显示,枇杷拟盘多毛孢菌种群内部出现了较大分化,差异明显的菌株可能是不同的生理小种。2.用枇杷叶片、果实等材料对枇杷拟盘多毛孢菌致病力评价,结果发现分别按10针刺处理背面、10针剌处理果实赤道部位接种发病较快,病斑明显。综合比较显示,选择叶片来评价具有发病快速,病斑明显的优点。不同致病力的菌株对评价方法的验证结果表明:在叶片上造成病斑大小的顺序与在其它材料上的顺序一致,说明此体系可以作为快速评价枇杷拟盘多毛孢菌致病力大小的方法。不同品种枇杷对评价方法的验证结果表明:拟盘多毛孢强致病菌(XZ-CQBB)接种在不同枇杷离体材料上能表现出品种的抗性差异,说明此致病力体系可对不同品系枇杷进行有关枇杷灰斑病抗病性的评价。3.采用连续两年对94份枇杷灰斑病田间病情指数的调查,结合室内接种枇杷灰斑病强致病菌的发病情况对不同品系枇杷抗灰斑病水平进行评级分级。筛选并确立了枇杷抗灰斑病能力水平的评价方法:田间评价采用病情指数算法分级,室内评价可选用病斑直径聚类分级和病情指数计算分级两种方法。综合分析发现,抗性一般的种质在全部供试种质中占较大比重,有少量高抗型和高感型种质,94份材料中约10份表现出稳定的、较强的抗性,说明在众多的种质资源中寻找抗病材料是可行的。发现不同来源地枇杷的抗性品系分布不一致;野生种的整体抗病水平强于栽培种:红肉枇杷整体抗性水平强于白肉枇杷,说明植株抗病能力可能与长期的自然选择有关,也可能与植物学性状的差异有关。还新发现天然三倍体枇杷表现出丰富抗性变化,是今后筛选抗性基因,选育抗性材料的新来源。实验还表明枇杷灰斑病的发病情况与树势强弱、管理水平、所处小环境及气候变化有较大关系。4.11种杀菌剂对拟盘多毛孢菌的室内毒力测定结果表明,各种杀菌剂在不同浓度下对拟盘多毛孢菌丝的生长有不同程度的抑制作用,抑制与药液浓度成正比。构建毒力回归方程并计算ECs0,比较各药剂的敏感性(方程直线斜率)和毒性(EC50值)发现,传统型药剂咪鲜胺、氟硅唑、丙环唑对枇杷拟盘多毛孢菌都有显著的抑制效果,EC50值分别为:0.0378mg/L,0.8732mg/L,1.6363mg/L。另外,嘧菌酯、甲基硫菌灵等新型药剂也表现出强烈的敏感性和抑制性,且几种药剂的田间防效均能达到50%以上。实验还发现多菌灵在室内毒力测定时表现良好但田间防效一般,说明可能由于田间长期施同种农药导致植株产生抗药性。
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