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研究背景和目的卵巢癌是威胁妇女健康的常见恶性肿瘤之一，其死亡率居妇科肿瘤的首位，超过2／3的患者确诊时已属晚期，5年存活率仅30％左右。卵巢癌中90％以上起源于卵巢表面上皮，目前上皮性卵巢癌的病因学及发病机制尚不十分清楚。随着肿瘤遗传学和分子生物学技术的发展，对卵巢癌的发病机理进行了广泛而深入的研究，认识到遗产物质的异常是肿瘤形成的主要原因。近年来发现卵巢癌普遍存在着染色体结构异常，其中20q13.2位点扩增较频，该位点的ZNF217（zinc finger protein，217）基因值得我们重视。ZNF217基因定位于人染色体20q13.2，它编码的Krupple样转录因子属于锌指蛋白家族。研究表明锌指蛋白家族成员在多种肿瘤的发生、发展过程中发挥重要作用。ZNF217利用PXDLS基序（位于C端结合蛋白底物结合域的结合沟里）和RRT基序（主要结合于C端结合蛋白的核苷酸结合域表面的沟），与C端结合蛋白相作用，而产生抑制转录的作用。ZNF217能诱导锚着非依赖性和血清非依赖性，意味着ZNF217能激活生长促进因子自分泌，并发现ZNF217基因在不同细胞内的表达差异与p53a和pRB的状态有关。文献报道ZNF217在肿瘤产生方面的作用主要有：降低某些肿瘤抑制因子的表达水平，提高癌基因的表达水平。有人通过Ntera2细胞内ZNF217的分析，发现多种启动因子与ZNF217和C端结合蛋白2结合，当去除ZNF217后，这些启动因子被激活。研究表明ZNF217基因参与食管鳞癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌、结直肠癌的发生发展过程。其中，ZNF217基因在乳腺癌的研究较为成熟，研究表明该基因是乳腺癌发生的两个促进因子之一。Tanner等人已经检测到卵巢癌患者中ZNF217基因发生扩增，表达增强，但仅局限于对该基因的结构改变方面的研究，目前未见其功能研究的相关文报道。我们的前期实验也证实ZNF217基因在浆液性囊腺癌中发生扩增，均呈高表达，在浆液性囊腺瘤及正常卵巢组织未发生扩增，均呈低表达。而且研究还发现ZNF217基因与卵巢癌的临床分期密切相关。因此，可以推测ZNF217作为转录调控因子有可能参与卵巢癌的发生发展过程。本研究重点探讨ZNF217基因在卵巢癌中的表达及临床意义，构建RNAi载体，并进行相关验证，采用体外实验对干扰前后细胞株的生物学特性的变化进行研究，为后续成功探讨ZNF217基因介导的卵巢癌发病分子机制的研究奠定基础。方法1、利用免疫组织化学法检测ZNF217基因在卵巢囊腺癌组织中的蛋白表达应用免疫组织化学S-P法，检测30例卵巢囊腺癌和配对的30例卵巢囊腺瘤及7例正常卵巢组织中ZNF217基因蛋白的表达。2、沉默ZNF217基因在卵巢癌细胞株中的表达设计ZNF217基因干扰片段，构建重组质粒载体pGenesil／ZNF217shRNA，利用阳离子脂质体Lipofectaming TM2000将pGenesil／ZNF217shRNA导入人卵巢上皮性癌细胞株HO-8910中，用空质粒载体做阴性对照。经G-418筛选获得抗性单克隆，挑取荧光强的克隆进行扩大培养，荧光定量RT—PCR和Western blot鉴定干扰效果。3、统计方法应用SPSS13.0软件进行数据分析，免疫组织化学采用非参数Kruskal—Wallis检验。结果1、ZNF217基因在卵巢囊腺癌组织中的蛋白表达免疫组化结果显示ZNF217基因在正常卵巢、囊腺瘤和囊腺癌三种类型的组织中表达差异具有显著性（x2=15.822，p=0.000），而且ZNF217蛋白高表达与卵巢癌的发生显著相关（r=0.627）。晚期卵巢癌组织中ZNF217蛋白表达与早期具有显著性差异（x2=5.573，p=0.018），且ZNF217基因的蛋白表达与卵巢癌的临床分期相关（r=0.705）。2、沉默ZNF217基因在HO—8910细胞中的表达采用pGenesil质粒载体系统，构建了针对靶基因ZNF217的2个RNAi载体pGenesil／ZNF2171shRNA和pGenesil／ZNF2172shRNA。经测序结果证实后，利用脂质体转染技术将pGenesil／ZNF2171shRNA和pGenesil／ZNF2172shRNA分别导入HO—8910细胞，后续实验采用转染率较高的pGenesil／ZNF2171shRNA进行。转染48h加含G—418的培养基筛选获得抗性单克隆。荧光定量RT-PCR和Western Blot结果发现ZNF217在干扰克隆2中表达降低最明显（命名为HO-8910／ZNF217-），干扰率达86％。结论ZNF217基因与卵巢癌关系密切，成功沉默ZNF217基因在卵巢癌HO—8910细胞中表达，为后续实验奠定基础。