脱皮马勃止血活性成分及其指纹图谱的研究

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脱皮马勃Lasiosphaera fenzlii Reich.属于灰包科脱皮马勃属真菌,是中国药典2005年版规定的三种正品马勃之一,又名马疙,马屁勃,马屁包等,主产分布于内蒙、辽宁、安徽、甘肃、江苏、云南等地区。具有清肺利咽、止血等功效,用于风热郁肺咽痛、咳嗽、音哑及各种出血。为我国历史悠久的传统民间中药,中医临床作为止血药物疗效确切。国内外对脱皮马勃的止血活性成分、质量标准的研究很少。在综述了前人对脱皮马勃的化学成分和药理学研究的基础上,我们拟对脱皮马勃的化学成分做进一步的研究。因此本课题组针对脱皮马勃止血活性成分进行了系统的分离,从其45%乙醇提取液中,经溶剂分步萃取,反复硅胶柱色谱,ODS柱色谱,葡聚糖凝胶色谱,反复重结晶,制备高效液相色谱等方法,从中分离得到12个化合物,经理化性质和波谱学数据等手段鉴定了其中10个,其结构分别为4,6-dihydroxyisoindol-1,3-dione (1), 4,6-dihydroxyisoindol-1-one (2), clitocybin A (3),4,6-dihydroxy-1(3H)-isobenzofuranone (4),5,7-dihydroxy-1(3H)-isobenzofuranone (5),4-hydroxymethyl-2-furaldehyde (6), p-dihydroxybenzene (7),3,5-dihydroxybenzoic acid (8), sucrose (9), P-sitosterol (10)。其中化合物1、2为未见文献报道的新化合物,化合物4为首次分离得到的天然产物,化合物3、5-9为首次从马勃中分离得到。自全国各地药店和产区收集了10个脱皮马勃样品,对其进行质量控制方法研究。通过考察色谱分离条件,建立了脱皮马勃样品的高效液相指纹图谱,图中8个主要色谱峰分别指认为4,6-dihydroxyisoindol-1,3-dione,4,6-dihydroxyisoindol-1-one, clitocybin A,4,6-dihydroxy-1(3H)-isobenzofuranone,5,7-dihydroxy-1(3H)-isobenzofuran-one, 4-hydroxymethyl-2-furaldehyde,p-dihydroxybenzene,3,5-dihydroxybenzoic acid。对10个不同产地的脱皮马勃样品进行了指纹图谱分析,并将获得的数据结果进行相似度分析。结果表明,采用所建立的指纹图谱分析方法,可将10个脱皮马勃样品分为3类。三类的相似度在分别在0.9-1.0、0.6-0.9和0.2-0.4之间。其中对照药材和来自道地产区的样品与对照药材划分到了一类(0.9-1.0),说明所建方法能很好地区分脱皮马勃药材的优劣,为脱皮马勃的质量控制方法做了有意义的补充。同时发现,4,6-dihydroxyisoindol-1,3-dione和5,7-dihydroxy-1(3H)-isobenzofuranone两个成分的变化对脱皮马勃药材类别划分有着较大的影响。采用HPLC对脱皮马勃中4,6-dihydroxyisoindol-1,3-dione和5,7-dihydroxy-1(3H)-isobenzofuranone两个主要成分进行了同时定量。为脱皮马勃的质量控制方法提供了定量依据。本研究是在活性测试、结构鉴定、指纹图谱的基础上,对脱皮马勃药材的质量控制方法进行了研究,并对质量标准提出了建议。为以后对脱皮马勃的研究与开发,提供初步的理论和实验依据。
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