三氯苯酚降解相关基因的合成与功能分析—PsUGT2I基因

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三氯苯酚是一种含氯芳香环化合物,在自然界中难以降解,并对人类具有具有致癌、致畸、致突变的“三致”效应,有六种同分异构体。目前,化学和物理分解法不仅费用高昂,效果差,甚至还会产生二次污染,研究还不是很完善。利用植物转基因技术,采用植物降解、微生物降解、或催化转化高毒性芳香化合物,将成为安全、快速、高效、经济的新型治理方法。糖基转移酶(Glycosyltransferase,简称GTs)超家族,在生物体内催化活化的糖连接到不同的受体分子,如蛋白、核酸、寡糖、脂和小分子上,形成聚糖或糖蛋白、糖脂等的酶。存在于植物体内的糖基转移酶是参与糖苷化的重要成元。而糖苷化过程是次级代谢的重要步骤。已经有报道,植物利用此过程可以对含有苯环的芳香烃、氯代物具有转化、降解的功能。本研究根据EMBL中公布的欧洲云杉(Picea Sitchensis)尿嘧啶-葡糖转移酶(UGT2夕基因,再依据植物密码子偏好性,利用PTDS法化学合成PsUGT2I基因。合成的PsUGT21基因翻译所得的氨基酸序列与网上公布的PsUGT2氨基酸序列一致。为了进一步分析PsUGT2I基因的功能,首先构建双元表达载体,电击转化到农杆菌中。通过蘸花法转化拟南芥。经潮霉素筛选、PCR检测,得到了转基因阳性植株。对转基因植株的生理分析表明,相对于野生型,PsUGT2I转基因拟南芥植株对2,4,5-TCP耐受性比较强;且转基因植株表现出较低的可溶性糖含量。同时,提取拟南芥蛋白液用作体外降解TCP分析,发现转基因植物对2,4,5-TCP的降解转化能力有所提高。然后构建胞内表达载体,通过电击转化得到转基因的毕赤酵母,来进一步研究PsUGT2I基因的功能。对于含有2,4,5-TCP的选择性培养基,转基因毕赤酵母具有更好的耐受性。液氮研磨法获得酵母蛋白,SDS-PAGE显示该蛋白分子量在54KDa;高效液相色谱层析法显示在体外情况下,一小时可以降解43.3%的2,4,5-TCP。本研究可以为土壤污染的植物修复、微生物修复提供一个新的技术路线。
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