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目的:通过对乙型肝炎母婴患者进行血清学、基因学检测及流行病学调查,探讨乙型肝炎病毒(HBV)血清标志物、HBV-DNA含量及基因变异与母婴传播宫内感染的关系,从而指导临床对HBV母婴传播进行有效的阻断。方法:1按照实验设计标准在石家庄市第六医院和河北医科大学第二医院收集乙肝孕妇共374例,签署知情同意书,收集相关资料,填写调查情况表;2采集上述入选孕妇静脉血及其新生儿24h内静脉血或脐带血,分离血清进行相应血清学及HBV-DNA定量检测后,-20℃冻存。并对幼儿于出生后1月、6月和1年各采血一次,同样的程序处理;3标本在冷冻条件下分批送至河北省疾病预防控制中心-80℃冻存,复查血清学及HBV-DNA定量检测;4参考NCBI上已知的HBV全基因及各片段的基因序列,查找相关文献,设计并合成特异性的扩增引物和测序引物;5采用SPSS19.0软件对标本血清学及HBV-DNA定量结果进行统计学处理,选取试验组和对照组。计数资料用卡方检验,计量资料用均数±标准差,P<0.05提示有统计学意义;6分组提取HBV-DNA,PCR扩增后测序;7测序结果用DNAStar软件拼接后,分析HBV核苷酸和氨基酸的同源性,并对其基因变异特征进行分析讨论。结果:1乙肝孕妇374例中HBs Ag、HBe Ag、HBc Ab阳性患者占48.66%(182/374),HBs Ag、HBe Ab、HBc Ab阳性患者占39.57%(148/374),其余型别共11.77%(44/374);HBs Ag、HBe Ag、HBc Ab阳性患者HBV-DNA检出率为92.8%(169/182),HBs Ag、HBe Ab、HBc Ab阳性患者HBV-DNA检出率为47.3%(70/148),两组患者lg HBV-DNA均数分别为7.26±1.56copies/ml、4.89±0.95copies/ml。两组HBV-DNA阳性检出率比较,组间差异存在统计学意义(χ2=84.83,P<0.01)。两组HBV-DNA含量对数值比较,P<0.01,组间差异存在统计学意义。375例新生儿出生24h内HBs Ag阳性检出率为7.47%(28/375),HBV-DNA阳性率为2.40%(9/375),其中6例新生儿HBs Ag和HBV-DNA均为阳性,最后得出新生儿出生24h内HBV感染数为31例,感染率为8.27%(31/375),并且其母亲均为HBs Ag、HBe Ag、HBc Ab阳性患者;幼儿出生1月后复查外周血HBV标志物以及HBV-DNA,其中HBs Ag阳性率为4.00%(15/375),HBV-DNA阳性率为1.07%(4/375),其中2例幼儿HBs Ag和HBV-DNA均为阳性,得出幼儿出生1月后HBV感染数为17例,感染率为4.53%(17/375);因此,新生儿出生24h内与幼儿出生1月后感染率进行比较,两者差异有统计学意义(χ2=4.36,P<0.05)。幼儿出生6月后复查外周血HBs Ag和HBV-DNA阳性率分别为3.73%(14/375)、1.07%(4/375);幼儿出生1年后复查结果与出生6月后无差别。2 HBV S基因核苷酸同源性比较结果显示,编号A68、A7、A7B0与参考序列AF100309的同源性分别为99.7%、99.3%、99.3%,属于B基因型,试验中其他标本与AF286594同源性均大于98.5%,属于同一基因型C型;另外,母亲与新生儿出生24h比较,A7与A7B0、A41与A41B0、A31与A31B0、A72与A72B0、A90与A90B0、A135与A135B0的同源性分别为100%、98.2%、100%、99.9%、99.8%、99.9%,幼儿出生后1月与6月甚至1年,基因也均无明显变化,同源性很高。常见的基因变异有:A7与A7B0共同变异345G→A、793G→A、796G→T、799G→A,A41B0、a89、A106共同变异783G→A、592C→T,A41B0与A198共同变异508G→A,A31、A198、A219共同变异499T→C,A41与A41B0共同变异289A→T,A41基因变异302G→A、241A→G、320C→G,A68基因变异482A→G、724C→T,A41B0基因变异438T→C、776A→C、759G→C,引起相应的氨基酸变异有:A7与A7B0共同变异Y64C、I213M,A41B0与a89、A106共同变异N210S,A41氨基酸变异S50G,A68氨基酸变异V110I,A41B0氨基酸变异S95L、L208I、A202G。3所有标本Pre-S基因核苷酸同源性比较结果均在96%以上,常见的变异有:A41、A31、A135、A72共同变异2860G→A引起氨基酸变异Q4K,A7、A7B0共同变异3061C→T引起氨基酸变异P72L,A7、A41、A41B0共同变异3081T→G引起氨基酸变异G79W,还有很多突变如A7基因变异3059T→A,A41B0基因变异3062A→C,A7、A7B0基因变异3092G→A未引起氨基酸变异。幼儿出生后1月与6月甚至1年,基因均无变化。4 HBV X区相同基因型标本之间核苷酸同源性均在96%以上,常见的变异有:A135基因变异2143A→G,A173、A226共同变异2146C→T,A31、A135共同变异2167A→G,A7、A222、A226共同变异2182G→T,A31、A72、A173、A198、A219共同变异2198T→C,均未引起氨基酸的变异。幼儿出生后1月与6月甚至1年,基因均无变化。5所有标本HBV C区核苷酸同源性比较结果均在96%以上。基因变异有:1915G→A,1936T→C,2011G→A,3205T→C,但是引起相应的氨基酸变化仅有一个D61Y。幼儿出生后1月与6月甚至1年,基因均无变化。6 HBV P区相同基因型标本之间核苷酸同源性均在96%以上。P区基因变异除去与S区基因重叠部分外,仍有变异:A106、A198、A219共同变异855T→A引起氨基酸变异M573L,A106、a129共同变异876 C→T引起氨基酸变异Y579I,A41、A41B0、A90共同变异1092 C→T引起氨基酸变异Y651H,以及未引起氨基酸变异的突变A41、A41B0、A90共同变异1479C A,A41、A41B0共同变异1497 T→G。幼儿出生后1月与6月甚至1年,基因均无变化。结论:1 HBs Ag、HBe Ag、HBc Ab阳性孕妇患者HBV-DNA阳性检出率明显高于HBs Ag、HBe Ab、HBc Ab阳性和其他患者;孕妇体内HBV-DNA含量的高水平表达会增加母婴传播宫内感染的机率。2新生儿出生24h内的血清HBs Ag和HBV-DNA携带情况,不能作为判断母婴传播宫内感染的标准。3 HBV S基因中302G→A、345G→A引起的氨基酸变异S50G、Y64C,可能是导致母婴传播宫内感染的原因。4 Pre-S、X、C、P基因片段在母婴传播宫内感染标本和对照组中均有突变出现,其突变意义还不能确定,仍需做进一步的研究。5除编号A41母子基因同源性为97.2%外,短时间内母子HBV基因无变异。