东莨菪碱预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的实验研究

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[目的]本研究目的是通过建立大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型,测定肝脏缺血再灌注损伤后血清中ALT、AST水平、血浆中XOD、MDA、TNF-、IL-10含量的变化,并对肝脏组织进行病理组织学结果观察,进一步明确肝脏缺血再灌注损伤的发生机制;并通过应用东莨菪碱进行预处理,观察其对以上指标的影响,明确东莨菪碱对肝脏的保护作用机制。[方法]Sprague Dawley(SD)雄性大鼠60只,体重范围300±50g,随机分为3组,每组20只;A组为假手术组,实验过程只开腹游离肝十二指肠韧带,不阻断肝脏血流,观察至各时间点后常规取血、剪取肝脏;B组为缺血再灌注组,麻醉完全后取上腹部正中切口约2cm入腹,显露第一肝门,按照Pringle’s法用无损伤纤维血管夹夹闭肝动脉、门静脉及胆总管,钳夹30mins后恢复入肝血流,造成肝脏缺血再灌注损伤模型;C组为东莨菪碱组,术前3天开始每天按0.006mg/kg体重经腹腔注射氢溴酸东莨菪碱注射液,术前30分钟按0.006mg/kg体重通过舌下静脉给药1次,手术方法同B组;根据缺血再灌注时间的不同,每组又分成4个时点(n=5),T1时点,阻断30mins再灌注0mins;T2时点,阻断30mins再灌注30mins;T3时点,阻断30mins再灌注60mins;T4时点,阻断30mins再灌注120mins。各组大鼠分别在缺血再灌注各时间点于下腔静脉取血约5ml,血液经离心后取上清液行丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、肿瘤坏死因子(TNF-)、白细胞介素10(IL-10)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、丙二醛(MDA)含量的测定;同时剪取肝脏组织,行肝脏组织病理学检测。[结果]1.血清ALT、AST的活性变化与A组比较,B组(缺血再灌注组)血清ALT、AST水平于T1、T2、T3、T4四时点均升高(p0.05),并且随时间的延长而逐步升高(p0.05);与B组比较,C组(东莨菪碱组)血清ALT、AST水平均在对应时点下降(p0.05)。2.血浆中丙二醛(MDA)含量变化与A组比较,B组(缺血再灌注组)血浆MDA含量于T1、T2、T3、T4四时点均升高(p0.05),并且随时间的延长而逐步升高(p0.05);与B组比较,C组(东莨菪碱组)血浆MDA水平均在对应时点下降(p0.05),并且随时间的延长,MDA水平逐渐上升(p0.05)。3.血浆中黄嘌呤氧化酶(XOD)活性变化A组(假手术组)在缺血再灌注后的T1、T2、T3、T4四个时点血浆XOD活性无明显变化,差异无统计学意义(p0.05);与A组比较,B组(缺血再灌注组)血浆XOD含量于T1、T2、T3、T4四时点均升高(p0.05),并且在T3时点达高峰,T4时点仍处于较高水平(p0.05);与B组比较,C组(东莨菪碱组)血浆XOD活性均在对应时点下降(p0.05),但其含量仍然高于A组,差异有统计学意义(p0.01)4.血浆中TNF-、IL-10检测结果与A组比较,B组(缺血再灌注组)TNF-含量在T1、T2、T3、T4四时点均升高(p0.05),随时间的延长逐渐升高,于T4时点达高峰(p0.05);血浆IL-10含量在T1时点有上升势头,但于T2时点开始降低,并且随时间的延长而进行性降低(p0.05);与B组比较,C组血浆TNF-水平均在对应时点下降(p0.05),IL-10含量均在对应时点升高,差异有统计学意义(p0.05)。5.肝组织病理结果A组大鼠肝脏结构形态大体正常;B组可见肝细胞水肿、脂肪变性,胞浆疏松化、淡染,肝血窦扩张、淤血,可见肝细胞有点状坏死,部分出现局灶性坏死,周围有大量炎性细胞浸润,组织损伤随缺血再灌注时间的延长愈加明显。C组肝细胞有轻度水肿及脂肪变性,未见明显坏死,有少量炎细胞浸润,较B组其损伤明显减轻。[结论]1.大鼠肝脏缺血再灌注损伤可以通过自由基损伤、促进TNF-的合成,减少IL-10的释放等途径来杀伤肝细胞。2.东莨菪碱预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤具有保护作用,可能是通过抑制自由基生成、降低脂质过氧化损伤、稳定肝细胞生物膜、抑制TNF-的合成、促进IL-10的分泌等产生的。
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