论文部分内容阅读
目的：1.观察缝隙链接蛋白CX32、CX36、CX43在VPA自闭症模型大鼠前额叶皮层的表达。2.观察针刺长强穴对VPA自闭症模型大鼠前额叶皮层缝隙链接蛋白CX32、CX36、CX43的调控。方法：雌、雄各一只合笼过夜,检查到雌鼠排出于便盘或仍停留在阴道内的白色或淡黄色半透明的阴栓的记胚胎第0.5天(Embryofoday, EO.5)。确认受孕雌鼠单独饲养,随机将受孕母鼠分成两组,一组用0.85%的生理盐水配VPA粉沫成250mg/ml的溶液,在E12.5时ip600mg/kg是为模型组(记为VPA组)；对照组为未进行任何干预的正常母鼠产下的正常仔鼠(记为Control组)。对日龄为24天(Posinatal day, PN24)内的仔鼠每组随机取10只,睁眼实验于12、14、15、16日龄进行、强迫游泳试验于9、11、13、15日龄进行、水迷宫测试于24-28日龄进行,筛选后得到自闭症模型大鼠。随机挑选分为长强组、非穴组、模型组每组6只；正常Wistar大鼠子代随机挑选6只作为空白组。长强组取长强穴,非穴组针刺非穴胁下非经非穴点,具体定位为髂后上棘上2cm,脊柱旁开5cm),时间1min,10d为1疗程,干预3个疗程,每个疗程之间间隔2d,空白组与模型组模拟每日抓取1min,在同等条件下饲养。干预结束后,断头取脑,用免疫组化方法检测大鼠前额叶皮层缝隙链接蛋白CX32、CX36、CX43蛋白的表达,通过显微镜观察额叶皮层区阳性细胞百分率,测定特异性免疫反应产物的平均光密度值来判断结果。结果：1.睁眼试验VPA自闭症模型组幼鼠睁眼时间较空白组晚,出生后PN14、PN15、PN16均有显著性统计学差异(P<0.05),PN12无显著性差异(P>0.05)。2.游泳试验VPA自闭症模型组大鼠的游泳能力在PN9和PN11时与空白组相比无显著差异(P>0.05),而到PN13和PN15时模型组游泳能力较空白组低下,有显著性差异(P<0.05)。3.水迷宫干预前模型组、长强组、非穴组找到平台的时间较空白组长(P<0.05)；干预后长强组找到平台的时间短于非穴组和模型组(P<0.05)。干预前模型组、长强组、非穴组平均速度较空白组慢(P<0.05)；干预后长强组平均速度较非穴组和模型组快(P<0.05)。4.空白组CX43、CX36、CX32表达高于模型组,说明自闭症模型大鼠大脑前额叶皮层的CX43、CX36、CX32表达降低(P<0.05)；针刺组的CX43、CX36、CX32长强组显著高于非穴组(P<0.05)。结论：1.缝隙链接蛋白CX32、CX36、CX43在VPA自闭症模型大鼠前额叶皮层的表达。2.针刺长强穴可提高VPA模型大鼠前额叶皮层缝隙链接蛋白CX32、CX36、CX43的表达。