Hippo通路对口虾蛄乙酸乙酯提取物抑制鼻咽癌生长机制研究

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[目的]:  研究Hippo通路蛋白在人鼻咽癌的功能表达及其在口虾蛄乙酸乙酯提取物(EOS)抑制人鼻咽癌细胞株CNE1及CNE1-GL生长中的作用。  [方法]:  1.免疫组化染色法检测YAP蛋白在人鼻咽癌组织及正常鼻咽黏膜组织中的表达;  2.Western Blot检测YAP蛋白在人永生化鼻咽上皮细胞系NP69细胞及人鼻咽癌细胞株CNE1、CNE1-GL、CNE2、SUNE1-和HONE-1细胞中的表达水平;  3.Western Blot检测Hippo通路抑制剂溶血磷脂酸(LPA)不同时间段作用于人鼻咽癌细胞株CNE2后p-YAP的蛋白表达变化;  4.MTT比色法检测不同浓度EOS对人鼻咽癌细胞株CNE1及CNE1-GL细胞的生长抑制作用;  5.流式细胞术检测不同浓度EOS对人鼻咽癌细胞株CNE1及CNE1-GL细胞周期的影响;  6.Western Blot检测不同浓度EOS作用人鼻咽癌细胞株CNE1及CNE1-GL细胞后YAP、p-YAP及survivin蛋白的表达情况。  [结果]:  1.YAP蛋白在正常鼻咽黏膜组织弱阳性,主要表达于黏膜基底层,而在鼻咽癌组织中,主要表达于肿瘤细胞;  2.YAP蛋白在不同鼻咽部细胞株中的表达差异性表达:YAP蛋白在正常永生化上皮细胞NP69细胞中表达较最弱,CNE1-GL细胞YAP表达水平高于CNE1,低分化鼻咽癌细胞株CNE2细胞中表达最强;  3.LPA可诱导YAP去磷酸化,从而抑制Hippo信号通路,促进肿瘤的发生发展;  4.MTT实验结果,随着EOS药物浓度的增加,细胞株CNE1及CNE1-GL的细胞增殖能力明显下降;  5.流式细胞术检测结果显示,随着EOS药物浓度的增加,CNE1阻滞于S期,CNE1-GL细胞阻滞于G1期;  6.不同浓度EOS处理人鼻咽癌细胞株CNE1及CNE1-GL细胞后,Western Blot结果显示,EOS诱导p-YAP蛋白表达升高,survivin蛋白表达下降。  [结论]:  1.YAP蛋白在鼻咽癌组织及细胞中的表达显著高于正常,说明YAP蛋白与鼻咽癌的发生发展相关;  2.EOS可抑制人鼻咽癌细胞株CNE1及CNE1-GL细胞增殖能力,并具有明显的量-效关系;  3.EOS可能通过影响人鼻咽癌细胞株CNE1及CNE1-GL细胞的周期分布,抑制细胞的增殖;  4.EOS能够诱导p-YAP蛋白表达升高,降低survivin蛋白的表达。
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