姜黄挥发油对黑色素瘤wm9细胞增殖与凋亡的影响

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目的:研究姜黄挥发油对人皮肤黑色素瘤wm9细胞增殖与凋亡的影响,并探究其凋亡机制。方法:应用不同浓度的姜黄挥发油分别作用于黑色素瘤wm9细胞24h、48h、72h,用Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测增殖抑制率;倒置显微镜观察细胞形态学变化;酶联免疫检测仪检测Caspase-3酶活性;流式细胞检测细胞周期和凋亡。结果:本实验通过CCK-8检测不同浓度(0、5、10、20、40μmol/L)姜黄挥发油作用黑色素瘤wm9细胞24h、48h、72h后,表现出不同程度的抑制作用,药物浓度从低浓度至高浓度,抑制率呈增高趋势,且其作用方式呈现时间-剂量依赖性,当药物浓度达到40mg/L,作用48h时,抑制率最明显;倒置显微镜下观察到当加入药物后,表现为细胞形态不规则,细胞增殖速度明显变慢,当药物浓度达到20 mg/L,细胞核固缩,部分肿瘤细胞膜开始破裂,可见部分细胞内容物释放,当药物浓度达到40mg/L,已不能见到正常肿瘤细胞结构,可见大量的细胞碎片;Caspase-3酶活性检测表明,姜黄挥发油对黑色素瘤wm9具有促进凋亡作用,且随着药物浓度的增加,呈现药物浓度-活性正相关性,当药物浓度浓度达到40mg/L,此时Caspase-3酶活性达到最大值;姜黄挥发油作用于黑色素瘤wm9细胞48h后,可见细胞均有不同程度的凋亡,且随着药物浓度的增加,呈药物浓度-凋亡率正相关性,早期凋亡率分别为(12.30±0.01)、(11.95±0.04)、(14.63±0.12)、(25.74±0.20)%,晚期凋亡率分别为(10.18±0.02)、(13.74±0.13)、(35.68±0.21)、(58.14±0.13)%,可知,早期凋亡率和晚期凋亡率在药物浓度为40mg/L达到最大值,且在同等药物浓度下,晚期凋亡率较早期凋亡率更高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),细胞周期检测发现G1、S期细胞随着药物浓度的逐渐增高,细胞数目呈现递减趋势,呈现药物-细胞数目负相关性,而G2期细胞随着药物浓度的增高,该期细胞数目呈现递增趋势,表明细胞被阻滞在G2/M期。结论:姜黄挥发油对黑色素瘤wm9细胞具有增殖抑制及促进其凋亡的作用,其凋亡的机制可能与激活了细胞凋亡的关键酶Caspase-3酶、使细胞正常周期阻滞,从而抑制肿瘤细胞增殖与分化。
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