抗猫杯状病毒单克隆抗体的制备及双抗夹心ELISA检测方法的建立

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猫传染性鼻-结膜炎是由猫杯状病毒(FCV)引起的猫上呼吸道感染、慢性肠胃炎以及口腔等疾病,是猫一种重要的传染病。该病发病率高并呈世界性分布,极易感染一岁内的幼猫,导致幼猫的死亡。由于FCV临床症状复杂,且猫杯状病毒常常与其他病毒或寄生虫混合感染,这样就增加了FCV的临床检测的困难,因此急需建立一种快速、准确、简单的诊断FCV的方法。本实验利用饱和硫酸铵沉淀、差速离心、CsCl密度梯度离心方法纯化了猫杯状病毒(FCV),通过杂交瘤细胞的阳性筛选,获得三株稳定分泌抗FCV McAb的杂交瘤细胞株,分别命名为D8、E5、H4,其中D8、E5为IgM亚类型抗体,H4为IgG2b亚类型抗体。杂交瘤细胞培养上清及腹水效价分别为2~7和1000×2~7。三株单抗对FCV均呈阳性,具有良好的特异性。根据E5、H4二株单抗对猫杯状病毒的识别位点不同,分别用来包被酶标板以及制备酶标二抗,建立了检测猫杯状病毒的双抗夹心ELISA方法。
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