皮蝇素HA基因的克隆及在杆状病毒表达系统的表达

来源 :中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yang20090907
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该文根据HA基因的编码序列,设计分别带有限制性酶切位点BamH I和Xho I的一对引物,通过高保真Taq酶从质粒pET28b-HA扩增出HA基因.扩增出的HA基因PCR产物经BamH I和Xho I酶切并纯化,然后与经同样酶切过的质粒pBacPAKHis1用T4连接酶连接,构建重组转移质粒pBacPAKHis1-HA.纯化后的重组转移质粒与线性化家蚕核型多角体病毒BmNPV(杆状病毒)DNA共同在脂质体的作用下转染家蚕细胞,通过同源重组产生重组病毒.重组病毒通过空斑测定试验,纯化重组病毒,并通过PCR鉴定.重组病毒通过感染家蚕细胞来表达目的蛋白,感染5天后的细胞裂解液经Ni-NTA亲和层析柱纯化目的蛋白,所得纯化产物经-SDS-PAGE检测为一条30KD的蛋白.Western-blotting实验表明纯化的目的蛋白可以与兔抗HA血清反应,产生阳性条带.研究表明,HA基因在杆状病毒-家蚕细胞系统内的表达获得成功.这为将来的田间免疫实验提供了抗原量的保证,为进一步研制抗牛皮蝇蛆病的牛皮蝇素HA重组基因疫苗奠定了基础.
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