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间隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)是哺乳动物颗粒细胞特异表达的关键蛋白,在卵泡发育与卵母细胞成熟过程中起着不可或缺的作用。卵母细胞内高水平环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)对维持减数分裂停滞至关重要,虽然卵母细胞自身能合成cAMP,但研究表明,Cx43蛋白磷酸化引起的间隙连接通道关闭所造成的卵丘细胞向卵母细胞转运的cAMP下降是维持卵母细胞减数分裂的重要原因。另有研究报道,人为提升牛卵丘-卵母复合体(cumulus-oocyte complexes,COCs)内cAMP水平反过来能够显著增强复合体间隙连接功能,但是绵羊卵泡内cAMP水平与间隙连接蛋白Cx43蛋白表达或者功能变化的相关性,尚未见研究报道。本研究采用免疫组织化学染色技术检测绵羊未成熟COCs中Cx43蛋白表达,然后分别采用竞争性酶联免疫吸附技术和免疫印迹法检测了体外成熟过程中cAMP水平变化和Cx43磷酸化蛋白和总蛋白表达的情况。在不含促性腺激素的作用下,探究了 cAMP非特异性调节剂对绵羊COCs内cAMP的时间效应,以及cAMP对Cx43蛋白表达情况。结果表明:①Cx43蛋白只存在于绵羊卵丘细胞上,而卵母细胞不表达。②卵母细胞内cAMP在成熟培养30min时达到顶峰值,在培养6h时显示最低水平,两者与0h相比,均差异显著(P＜0.05);卵丘细胞内cAMP水平分别于成熟培养10min与1h出现两次峰值,两者与0h相比,均差异显著(P＜0.05)。③在成熟培养10min时,Cx43磷酸化蛋白表达瞬时增加(P＜0.01);在成熟培养10min和1h时Cx43总蛋白表达出现两次峰值。④在不含激素的培养体系中添加Forskolin与IBMX,培养10min后,Forskolin和IBMX处理组cAMP含量相对于未添加组升高了约6倍,差异显著(P＜0.05)。综上,本研究发现,Cx43蛋白只存在于绵羊卵丘细胞中。体外成熟培养过程中,绵羊卵丘细胞中cAMP含量出现了 2次峰值,第1次cAMP的升高所造成的Cx43磷酸化效应可能是为了阻止卵母细胞内cAMP水平下降的一种保护机制。绵羊COCs中Cx43总蛋白表达受cAMP正向调节,对卵母细胞减数分裂恢复前的间隙连接功能维持可能有重要作用。