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目的：非酒精性脂肪性肝炎(NASH)是非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的最重要的阶段,易发展为肝硬化、肝细胞癌。已有研究报道维生素D3在高脂饮食、硫代乙酰胺(TAA)、补铁联合胆碱缺乏氨基酸(CDAA)饮食诱导的动物模型中改善NFALD/NASH的进展,但尚不清楚补充外源性1,25(OH)2D3 (1,25-VD3)对单独CDAA饮食诱导的NASH是否有作用。本研究探讨补充不同剂量1,25-VD3对CDAA饮食诱导的大鼠NASH保护作用及其机制。方法：将6周龄雄性Wistar大鼠(150-180g)随机分为(1)对照组(CG),5只,给予胆碱充足的氨基酸(CSAA)饮食；(2)CL-缺乏组(CDG),5只,给予CDAA饮食；(3)CL-缺乏+不同剂量1,25-VD3组(CDVDG),即CDVDG1组5只、CDVDG5组5只、(CDVDG10组5只,分别IP1μg/kg、5μg/kg和10μg/kg 1,25-VD3,每周2次(周二和周六)。CG和CDG同期IP生理盐水10mL/kg。实验第12周末,禁食水12-13h,称大鼠体重,乙醚麻醉处死,经腹主动脉采血,分离肝组织,测量肝湿质量,并计算肝指数。检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、钙(Ca)、磷(P)、尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)、瘦素(LEP)、细胞角蛋白(CK) 18-M30、 25(OH)D3、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)水平,并计算胰岛素抵抗指数稳态模型评估(]HOMA-IR)指标；检测肝组织游离脂肪酸(FFA)、TG、硫代巴比妥酸反应物质(TBARS)、总抗氧化能力(TAOC)、CK18-M30水平；苏木素和伊红(H&E)染色、天狼星红(SR)染色观察病理形态学并评价非酒精性脂肪性肝病活动性积分(NAS)和纤维化积分；免疫组织化学法检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)和转化生长因子β-1 (TGF-β1)的表达,原位末端标记(TUNEL)染色法检测肝细胞凋亡；免疫印迹法(Western-blot)检测肝组织金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)和维生素D受体(VDR)的表达水平。最后制作1,25-VD3剂量反应曲线并进行相关分析。结果：1.CDG组与CG组比较1.1肝指数和肝湿质量CDG组大鼠肝指数(CDG vs CG:3.48±0.26% vs 2.72±0.13%,p<0.01)和肝湿质量(CDG vs CG:15.80±0.96 g vs 12.60±0.18g,均明显升高。1.2生化指标CDG组血清ALT (CDG vs CG:67.44±1.57 mmol/L vs 43.01±3.13 mmol/L,p<0.01)和AST水平(CDG vs CG:209.41±4.59 mmol/L vs 96.20±1.36 mmol/L,p<0.01)均明显升高：血清CHO水平(CDG vs CG:1.88±0.00 mmol/L vs 1.58±0.00 mmol/L,p<0.05)升高。1.3病理组织学评价CDG组JAS (CDG vs CG:7.40±0.40 分 vs 0.00±0.00 分,p<0.01)和纤维化积分(CDG vs CG:0.60±0.25 分 vs 0.00±0.00 分, p<0.01)均明显升高。1.4肝内脂质CDG组肝组织FFA (CDG vs CG:456.61±3.70 mmol/L/mg vs 332.98±2.55 mmol/L/mg, p<0.01)和TG水平(CDG vs CG:1.29±0.00 mmol/L/mg vs 0.37±0.04 mmol/L/mg,p<0.01)均明显增加。1.5血清FINS和HOMA-IRCDG组血清FINS (CDG vs CG:29.50±0.34 μIU/mL vs 26.49±0.76 μIU/mL, p<0.05) 和 HOMA-IR水平(CDG vs CG:11.07±0.20 vs 9.07±0.34,p<0.05)均升高。1.6血清LEPCDG组血清LEP水平(CDG vs CG:569.71±38.97 ng/L vs 408.24±43.71 ng/L,p<0.01)明显升高。1.7肝组织脂质过氧化和TAOCCDG组肝组织TBARS (CDG vs CG:233.46±1.03 pg/mL/mg vs 98.59±1.49 pg/mL/mg,p<0.01)和TAOC水平(CDG vs CG:1.10±0.04 mmol/mg vs 0.86±0.02 mmol/mg,p<0.05)均增加。1.8肝细胞凋亡CDG组肝组织TUNEL阳性细胞(CDG vs CG:36.80±1.83 vs 3.60±0.51,p<0.01)明显增加,血清CK18-M30水平(CDG vs CG:179.45±15.01 ng/L vs 97.15±4.89 ng/L,p<0.01)明显上调,肝组织CK18-M30水平(CDG vs CG: 9.05±0.43 μg/L/mg vs 15.86±0.12 μg/L/mg, p<0.01)明显下调。1.9 HSC活化CDG组肝组织α-SMA (CDG vs CG:45.40±2.42 vs 2.80±0.25, p<0.01), TGF-β1(CDG vs CG:62.80±2.92 vs 18.80±1.39,p<0.01) 和 TIMP-1表达水平(CDG vs CG:2.69±0.02 vs 1.51±0.02,p<0.01)均显著增加。1.10血清25(OH)D3和肝组织VDRCIDG组血清25(OH)D3 (CDG vs CG:253.72±4.10 μg/L vs 416.51±2.65 μg/L,p<0.01)和肝组织VDR表达水平((CDG vs CG:2.07±0.01 vs 3.66±0.11,p<0.01)均显著下降。2.CDVDG1,5,10组与CDG组比较2.1肝指数CDVDG5组大鼠肝指数(CDVDG5 vs CDG:2.95±0.13% vs 3.48±0.11%,p<0.05)明显下降。2.2生化指标CDVDG1、5 和 10组血清ALT(CDVDG1、5、10 vs CDG:54.63±2.25 mmol/L、 42.83±4.45 mmol/L、47.82±3.92 mmol/L vs 67.44±1.57 mmol/L, p<0.05,p<0.01、 p<0.01)和AST水平(CDVDG1,5,10 vs CDG:182.04±3.02mmol/L,148.01±2.2 mmol/L、148.42±6.41 mmol/L vs 209.41±4.59 mmol/L, p值均<0.01)均明显下降；CDVDG5组血清TG水平(CDVDG5 vs CDG:1.63±0.03 mmol/L vs 0.71±0.00 mmol/L,/p<0.01)上调,FBG水平(CDVDG5 vs CDG:7.70±0.03 mmol/L vs 8.44±0.11 mmol/L,p<0.05)下降。2.3病理组织学评价CDVDG5组NAS (CDVDG5 vs CDG:5.20±0.20 分 vs 7.40±0.40 分,p<0.01)明显下降,CDVDG1、5和10组纤维化评分均为0分,CDG组0.60±0.25分(p<0.01)。2.4肝内脂质CDVDG1和5组肝组织FFA水平(CDVDG1、5 vs CDG:432.54±3.70 mmol/L/mg、403.66±0.59 mmol/L/mg vs 456.61±3.70 mmol/L/mg,p<0.05、p<0.01)显著下降,CDVDG5组肝组织TG水平(CDVDG5 vs CDG:0.37±0.03 mmol/L/mg vs 1.29±0.00 mmol/L/mg, p<0.01)显著下降。2.5血清FINS和HOMA-IRCDVDG1、5和10组血清FINS水平(CDVDG1、5、10 vs CDG:27.20±0.91 μIU/mL、22.94±0.90 μIU/mL、21.47±0.77μIU/mL vs 29.5±0.34μIU/mL,p<0.05、p<0.01、p<0.01)均显著下降,CDVDG5和10组血清HOMA-IR水平(CDVDG5、 10 vs CDG:7.85±0.32、7.56±0.59 vs 11.07±0.20,p<0.01、p<0.05)均显著下降。2.6血清LEPCDVDG5组血清LEP水平(CDVDG5 vs CDG:445.87±14.98 ng/L vs 569.71±38.97ng/L,/p<0.05)下降。2.7肝组织脂质过氧化CDVDG1、5和10组肝组织TB ARS水平(CDVDG1、5、10 vs CDG: 206.21±1.15 pg/MLmg、164.19±6.14 pg/MLmg、188.85±2.61 pg/MLmg vs 233.46±1.03 pg/ML/mg, p值均<0.01)均显著下降。2.8肝细胞凋亡CDVDG1、5和10组肝组织TUNEL阳性细胞(CDVDG1、5、10 vs CDG: 27.60±2.80、11.60±1.33、29.00±2.05 vs 36.80d±1.83, p值均<0.01)均显著下降,CDVDG1、5口10组血清CK18-M30水平(CDVDG1、5、10 vs CDG:144.66±9.88 ng/L、105.59±8.48 ng/L、141.64±12.80ng/L vs 179.45±15.01 ng/L, p<0.05、p<0.01、p<0.05)均明显下调,CDVDG1、5和10组肝组织CK18-M30水平(CDVDG1、 5、10 vs CDG:11.09±0.24 μg/L/mg、12.90±0.08 μg/L/mg、11.38±0.06 μg/L/mg vs 9.05±0.43 μg/L/mg, p值均<0.01)均明显上调。2.9 HSC活化CDVDG5组肝组织α-SMA (CDVDG5 vs CDG:21.60±1.86 vs 45.40±2.42, p<0.01) 和 TGF-β1表达水平(CDVDG5 vs CDG:53.60±1.57 vs 62.80±2.92,p<0.05)均显著下降,CDVDG1和5组肝组织TIMP-1表达水平(CDVDG1、5 vs CDG: 2.04±0.05、1.56±0.05 vs 2.69±0.02,p<0.01)均显著下降。2.10血清25(OH)D3和肝组织VDRCDVIDG1、5和10组血清25(OH)D3水平(CDVDG1、5、10 vs CDG: 293.43±4.68 μg/L、342.71±0.51 μg/L、348.52±4.37μg/L vs 253.72±4.10 μg/L,p值均<0.01)和肝组织VDR表达水平(CDVDG1、5、10 vs CDG:2.62±0.02、3.36±0.05、 2.28±0.00 vs 2.07±0.01,p值均<0.01)均明显升高。3. CDVDG10组与CDVDG5组比较3.1肝组织NASCDVDG10组大鼠NAS (CDVDG10 vs CDVDG5:6.40±0.51 分 vs 5.20±0.20分,p<0.05)增加。3.2肝组织脂质过氧化CDVDG10组肝组织TBARS水平(CDVDG10 vs CDVDG5:188.85±2.61 pg/ML/mg vs 164.19±6.14 pg/ML/mg,p<0.01)明显增加。3.3肝细胞凋亡CDVDG10组TUNEL阳性细胞(CDVDG10 vs CDVDG5:29.00±2.05 vs11.60±1.33,p<0.01)增加；血清CK18-M30水平(CDVDG10 vs CDVDG5: 141.64±12.80 ng/L vs 105.59±8.48 ng/L, p<0.05)上调,肝组织CK18-M30水平(CDVDG10 vs CDVDG5:11.38±0.06μg/L/mg vs 12.90±.08μg/L/mg,p<0.01)下调。3.4 HSC活化CDVDG10组肝组织a-SMA (CDVDG10 vs CDVDG5:38.20±3.71 vs 21.60±1.86,p<0.05)和TIMP-1表达水平(CDVDG10 vs CDVDG5:2.44±0.08 vs1.56±0.05,p<0.01)均升高。3.5肝组织VDRCDVDG10组肝组织VDR表达水平(CDVDG10 vs CDVDG5:2.28±0.00 vs3.36±0.05,p<0.01)下降。4.1,25-VD3的量效关系曲线分析量效关系曲线分析提示,1,25-VD3对NASH具有保护作用,而且具有明显的量效关系,在血清CK18-M30和肝组织脂质过氧化、肝细胞凋亡、肝星状细胞(HSC)活化、VDR的剂量效应曲线呈“U”型或“倒U”型,表明高剂量可能产生不利的影响。结论：补充1,25-VD3对CDAA饮食诱导的大鼠NASH具有保护作用,可能与其提高血清25(OH)D3水平和肝组织VDR表达水平,抑制FFA和TG在肝脏中的积累、改善胰岛素和LEP抵抗、改善肝组织脂质过氧化、抑制肝细胞凋亡和HSC活化有关。补充高剂量1,25-VD3可能对血清CK18-M30和肝组织NAS、脂质过氧化、肝细胞凋亡、HSC活化、VDR产生不利的影响。