乙型肝炎e抗原（HBeAg）是由HBV DNA C基因区编码的一种非颗粒性的分泌型核壳蛋白，临床上将其作为判断HBV活动性复制的指标之一。HBeAg是重要的生物原材料，广泛用于HBV感染者血清学检测的相关诊断用品的制备。　　 根据中国HBV流行株序列设计合成了一对特异性引物，应用多聚酶链反应（PCR）技术，由乙型肝炎患者血清中扩增出HBeAg编码基因序列，将其克隆至克隆载体pMD-18T Simple vector，经酶切鉴定、序列测定正确后，再定向克隆到不同的原核表达载体pET-GST和pET-His中，构建了原核表达载体pGST-eAg和pHis-eAg。将重组质粒转化原核表达宿主菌大肠杆菌BL21（DE3）中，在IPTG诱导下，成功表达了重组HBeAg蛋白。SDS-PAGE分析结果表明，表达产物以融合蛋白包涵体形式存在。同时选用不同的诱导温度、不同的诱导剂浓度及不同的诱导时间对表达条件进行正交试验优化，得出pGST-eAg工程菌的最佳表达条件为：温度为30℃，IPTG浓度为0．6mmol/L，诱导时间为2h； pHis-eAg最佳表达条件为：温度为30℃，IPTG浓度为1．0mmol/L，诱导时间为4h。经Bandscan软件分析，pGST-eAg和pHis-eAg最高表达量依次为30％和39．2％。　　 对重组HBeAg融合蛋白进行包涵体提取、溶解和复性，再通过亲和层析法进行纯化，得到纯度达90％以上的重组蛋白。用抗-HBe单克隆抗体做Western blotting实验，结果表明重组HBeAg具有很好的免疫原性与反应原性，因此它具有与天然HBeAg蛋白相同的生物学活性。用纯化的表达产物为诊断抗原，通过对各反应条件的优化，初步建立检测抗-HBeAg抗体（HBeAb）的间接ELISA方法。同时采用了胶体金免疫层析技术（GICA），研制了用于检测HBeAb的胶体金免疫试纸条（ICS）。　　 本实验所得各种数据，为以后乙肝e抗原体外表达、分离、纯化以及诊断试剂的研制提供了具有参考价值的资料，并为该蛋白的结构和功能研究奠定了重要的物质基础。