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辣椒疫病是一种传播范围广,危害性大的世界性土传病害,其病原Phytophthoracapsici自从1922年被Leon Leonian首次确定之后,在世界各地均有发现。辣椒疫霉在生物分类学中属于卵菌门,卵菌纲,霜霉目,霜霉科,疫霉属,它主要侵染葫芦科、豆科、茄科、十字花科等四科约10个属的作物。辣椒疫霉对世界农业特别是辣椒生产造成了巨大的损失。辣椒疫病常规防治方法以施用农药为主,极大程度的破坏了生态环境。因此通过探索辣椒疫霉侵染机制研发新的防治方法迫在眉睫。 RxLR效应因子是指含有RxLR-DEER结构域,在辣椒疫霉侵染寄主时能进入寄主细胞,抑止寄主的防卫反应,从而有利于辣椒疫霉侵入与扩展的一类蛋白。为了从蛋白三维结构角度阐述RxLR效应因子作用机制,本研究克隆出多个RxLR效应因子基因,对其进行了原核表达,得到高表达量的重组菌株,并对表达产物进行纯化,然后用纯化后的蛋白进行蛋白结晶条件的筛选实验,目的是得到分辨率在3(A)以上的RxLR蛋白晶体用以进行RxLR效应因子三维结构的解析。主要结果如下: 1、本研究克隆了20多个RxLR效应因子基因,这些基因翻译的氨基酸序列都具有RxLR效应因子的结构域。 2、本研究尝试多种方法对表达的目的蛋白进行纯化条件的摸索,其中编码为129044效应因子蛋白较稳定,获得了浓度大于10mg/ml,纯度在95%以上的129044蛋白。 3、本研究对纯化好的129044蛋白进行了晶体生长条件的筛选,得到了质量较好的蛋白晶体,在上海同步辐射光源通过X光机衍射确定晶体最高分辨率为3.4(A)。 4、129044蛋白分辨率3.4(A)的晶体收集到了较好的一套数据,本研究尝试对129044蛋白晶体的结构进行解析,目前已经拿到129044硒代蛋白的晶体。