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在我国猪生产业中,产肉品质一直作为一项重要的经济指标,其中肌纤维是构成肌肉的基本单位,与产肉品质密切相关。肌纤维是由肌细胞分化融合而成,因此研究猪肌肉细胞分子发育的机制对提高猪肌肉品质和生产性能具有重要意义。巴马香猪是我国特有的地方猪种,与国外引进的杜洛克猪、大白猪、长白猪和皮特兰猪等猪种相比,它们具有肉质好、体型矮小、生长缓慢、胴体瘦肉率低、背膘厚度较高等特点,因此,巴马香猪和国外引进猪种被广泛作为研究不同类型猪肌肉发育的模型。骨骼肌的生长发育受到众多长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNAs)的调控,其中lncRNA-MEG3在骨骼肌生长发育过程中具有重要的调控作用,而lncRNA-MEG3上的单核苷酸多态性(SNPs)对猪骨骼肌卫星细胞(SCs)生长发育的影响及机制尚未阐明。通过筛查典型的瘦肉型猪(杜洛克猪、大白猪、长白猪、皮特兰猪)和脂肪型猪(巴马香猪)lncRNA-MEG3外显子上SNPs,对这些SNPs可能存在的功能进行分析,筛选出具有研究意义的SNPs。在瘦肉型猪和脂肪型猪lncRNA-MEG3外显子上共筛查到8处SNPs,其中有7处与猪经济类型具有显著相关性(P<0.001),然而仅有4处符合哈迪温伯格定律,它们分别是g.3087A>g,g.3108A>g,g.3398A>g和g.3971T>g,此外,基于猪不同的经济类型,此4处SNPs存在连锁不平衡效应,且在瘦肉型猪中的优势单倍型为TTCC,脂肪型猪中的优势单倍型为CCCA,且在两种经济类型的猪中,各单倍型频率呈现极显著性差异(P<0.001)。分别构建了两种优势单倍型的表达载体pcDNA3.1-MEG3-TTCC(简写p-M-T)和pcDNA3.1-MEG3-CCCA(简写p-M-C)瞬时转染至猪骨骼肌卫星细胞中,对lncRNA-MEG3的相对表达量进行检测,结果表明p-M-T组显著高于p-M-C组(P<0.01)。本研究进一步利用放线菌素D干扰lncRNA的合成来完成RNA稳定性检测,结果表明与p-M-T相比,p-M-C表达的lncRNA-MEG3更为稳定(P<0.05)。同时,利用Mfold Web在线预测软件比较分析了不同单倍型lncRNA-MEG3序列的二级结构和最小自由能,结果表明两种单倍型形成了完全不同的二级结构,MEG3-CCCA单倍型和MEG3-TTCC单倍型的最小自由能分别为-542.01 kcal/mol和-530.92 kcal/mol,这些证据都证明了与MEG3-TTCC单倍型相比,MEG3-CCCA单倍型的二级结构更加稳定。通过过表达p-M-C和p-M-T,利用CCK-8、qRT-PCR、Western Blot等实验研究两种单倍型对骨骼肌卫星细胞增殖和分化过程的影响,结果表明,过表达p-M-C和p-M-T均能抑制猪骨骼肌卫星细胞的增殖过程。其中与过表达p-M-C相比,过表达p-M-T对猪骨骼肌卫星细胞的增殖过程具有更强的抑制作用(P<0.05)。同时Western Blot实验结果表明,过表达p-M-T比p-M-C更显著地抑制PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2信号通路(P<0.05)。与之相反,过表达p-M-C和p-M-T均能促进猪骨骼肌卫星细胞分化过程中相关基因的表达及信号通路的激活,与过表达p-M-C相比,过表达p-M-T对猪骨骼肌卫星细胞的分化过程具有更强的促进作用(P<0.05),并对分化相关的JAK2/STAT3信号通路具有更显著的激活作用(P<0.05)。以上结果证明不同经济类型猪中lncRNA-MEG3外显子上SNPs能够影响lncRNA-MEG3的转录、稳定性、二级结构,最终影响了骨骼肌卫星细胞增殖和分化过程,为lncRNAs的多态性对猪骨骼肌生长发育的调控作用研究提供了理论依据。